尼古丁戒斷切口痛大鼠術(shù)后痛覺過敏機(jī)制的研究.pdf

1、第一部分：改良尼古丁依賴-戒斷大鼠模型的建立
　　 目的:
　　 通過間斷皮下注射尼古丁制作改良尼古丁依賴-戒斷大鼠模型。
　　 方法:
　　 SD大鼠30只，隨機(jī)分成5組，每組6只，為正常對(duì)照組（Control組）、生理鹽水組(NS組)、尼古丁3mg/kg/d組(NT3組)、尼古丁9mg/kg/d組(NT9組)和尼古丁18mg/kg/d組(NT18組)，分別不注射、生理鹽水、尼古丁1mg/kg、3mg/

2、kg和6mg/kg皮下注射，3次/d，連續(xù)7d。于第7d末次注射后60min皮下注射美加明1mg/kg。觀察大鼠注射尼古丁期間和戒斷后體重變化、存活情況和尼古丁戒斷評(píng)分。
　　 結(jié)果:
　　 與NT3組比較，注射尼古丁后第7d，NT9組和NT18組大鼠體重增加緩慢（3.8±1.3g，2±0.3gvs7.2±1.0g）(P＜0.05)，戒斷后第1d和第2d大鼠體重增加迅速(P＜0.01)，NT9組和NT18組大鼠美加明激發(fā)

3、后出現(xiàn)更多的戒斷癥狀(P＜0.01)，但NT18組大鼠死亡率達(dá)17％。
　　 結(jié)論:
　　 間斷皮下注射尼古丁9mg/kg/d連續(xù)7d可以成功制作改良尼古丁依賴-戒斷大鼠模型。
　　 第二部分：尼古丁戒斷切口痛大鼠疼痛行為學(xué)觀察
　　 目的:
　　 觀察尼古丁戒斷后和尼古丁戒斷切口痛大鼠術(shù)后足底機(jī)械刺激縮足閾值(MWT)和熱刺激縮足潛伏期(TWL)的變化。
　　 方法:
　　 SD

4、大鼠30只，隨機(jī)分為5組。①正常對(duì)照組（Control組，n=6）:大鼠在正常條件下飼養(yǎng)7d，不給予任何處理;②生理鹽水對(duì)照組(NS組，n=6):大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，分別于每天5:00，13:00和21:00時(shí)經(jīng)皮下注射生理鹽水，每次0.1ml，3次/d，連續(xù)7d;③尼古丁戒斷組(NT組，n=6):大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，分別于上述3個(gè)時(shí)間點(diǎn)經(jīng)皮下注射尼古丁每次3mg，3次/d，連續(xù)7d;④切口痛組(IP組，n=6):大鼠在正常條件下飼

5、養(yǎng)7d后于右后肢足底做切口痛模型;⑤尼古丁戒斷切口痛組(NT+IP組，n=6):大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，分別于每天上述3個(gè)時(shí)間點(diǎn)經(jīng)皮下注射尼古丁每次3mg，3次/d，連續(xù)7d，第7d注射尼古丁后于右后肢足底做切口痛模型。對(duì)Control組、NS組和NT組大鼠分別于第8d測(cè)量右下肢足底MWT和TWL的變化，連續(xù)7d;對(duì)IP組和NT+IP組大鼠分別于第8d測(cè)量下肢術(shù)側(cè)和健側(cè)足底MWT和TWL的變化，連續(xù)7d。
　　 結(jié)果:
　　

6、 1.尼古丁戒斷對(duì)大鼠疼痛行為學(xué)的影響
　　 (1)尼古丁戒斷對(duì)大鼠MWT變化
　　 與Control組相比，NT組大鼠在尼古丁戒斷后1～7d足底MWT明顯降低(P＜0.01)。組內(nèi)比較，NT組大鼠在戒斷后1d和2dMWT降低更為顯著(P＜0.01)。
　　 (2)尼古丁戒斷對(duì)大鼠TWL的影響
　　 與Control組相比，NT組大鼠在尼古丁戒斷后1～7d足底TWL明顯降低(P＜0.01)。組內(nèi)比較，N

7、T組大鼠在戒斷后第4dTWL降低更為顯著（P＜0.01）。
　　 2.尼古丁戒斷對(duì)切口痛大鼠疼痛行為學(xué)的影響
　　 (1)尼古丁戒斷對(duì)切口痛大鼠MWT的影響
　　 與IP組大鼠術(shù)側(cè)相比，IP+NT組大鼠術(shù)側(cè)MWT在術(shù)后1～7d明顯降低(P＜0.05);與IP組大鼠術(shù)側(cè)相比，IP組大鼠健側(cè)足底MWT在術(shù)后1～4d明顯升高(P＜0.05)，術(shù)后第5～7dMWT沒有差異(P＞0.05);與IP組大鼠健側(cè)相比，IP+NT

8、組大鼠健側(cè)在第1～7dMWT明顯降低(P＜0.05)。
　　 (2)尼古丁戒斷對(duì)切口痛大鼠TWL的影響
　　 與IP組大鼠術(shù)側(cè)相比，IP+NT組大鼠術(shù)側(cè)足底TWL在術(shù)后1～7d明顯降低(P＜0.05);與IP組大鼠術(shù)側(cè)相比，IP組大鼠健側(cè)足底TWL在術(shù)后1～6d明顯升高(P＜0.05);與IP組大鼠健側(cè)相比，IP+NT組大鼠健側(cè)足底TWL在術(shù)后1、2、3、5和6d明顯降低(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　

9、　 1.尼古丁戒斷可以引起大鼠疼痛敏感性增高。
　　 2.尼古丁戒斷可以引起切口痛大鼠痛覺敏感性增高，這與臨床上吸煙患者術(shù)后阿片類藥物需要量增加相一致，為進(jìn)一步研究其發(fā)生機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
　　 第三部分：脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞在尼古丁戒斷切口痛大鼠術(shù)后痛覺過敏中的作用
　　 目的:
　　 探討脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞在尼古丁戒斷切口痛大鼠術(shù)后痛覺過敏中的作用。
　　 方法:
　　 SD大鼠42只隨機(jī)分為3

10、組。①單純切口痛組（IP組，n=18）:根據(jù)處死取材時(shí)間再分為3個(gè)亞組，每組6只。大鼠正常條件下飼養(yǎng)，于右下肢足底做切口痛模型，術(shù)后第1、2、3、5、7d對(duì)大鼠右下肢足底進(jìn)行MWT和TWL的測(cè)定;②尼古丁戒斷切口痛組(NT+IP組，n=18):根據(jù)處死取材時(shí)間再分為3個(gè)亞組，每組6只。大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，于每天5:00，13:00和21:00時(shí)皮下注射尼古丁3mg/kg，3次/d，連續(xù)7d。第7d注射尼古丁后于大鼠右下肢足底做切口痛模

11、型，于術(shù)后第1、2、3、5、7d對(duì)右下肢足底進(jìn)行MWT和TWL的測(cè)定;③米諾環(huán)素組（M組，n=6）:同N+IP組，于大鼠做切口痛模型前1h腹腔內(nèi)注射米諾環(huán)素100mg/kg。然后分別于術(shù)后第1、2、3、5、7d對(duì)大鼠右下肢足底進(jìn)行MWT和TWL的測(cè)定。IP組和NT+IP組大鼠術(shù)后第1d痛行為學(xué)測(cè)試后處死取材;第2、3d分別測(cè)試痛行為學(xué)，于第3d處死取材;第5、7d分別測(cè)試痛行為學(xué)，于第7d處死取材。取脊髓腰膨大L4-6段，通過免疫組織化

12、學(xué)方法測(cè)定IBA-1標(biāo)記的陽性細(xì)胞的表達(dá)情況和數(shù)量。
　　 結(jié)果:
　　 1.腹腔內(nèi)注射米諾環(huán)素對(duì)尼古丁戒斷切口痛大鼠疼痛行為學(xué)的影響
　　 (1)與IP組比較，NT+IP組大鼠在術(shù)后1、2、3、5、7dMWT均顯著降低（P＜0.01）;與NT+IP組比較，M組大鼠在切口前1h腹腔內(nèi)注射米諾環(huán)素100mg/kg，在術(shù)后第1dMWT明顯升高（28.12±1.36gvs22.34±2.37g）(P＜0.01)，而第2

13、、3、5、7d沒有變化（P＞0.05）。
　　 (2)與IP組比較，NT+IP組大鼠在術(shù)后1、2、3、5、7dTWL均顯著降低(P＜0.01);與NT+IP組比較，M組大鼠在切口前1d腹腔內(nèi)注射米諾環(huán)素100mg/kg，術(shù)后第1dTWL明顯升高(7.54±1.26svs5.16±1.16s)(P＜0.01)，而第2、3、5、7d沒有變化（P＞0.05）。
　　 2.IBA-1標(biāo)記的活化小膠質(zhì)細(xì)胞的變化
　　 通過

14、免疫組織化學(xué)由IBA-1標(biāo)記的活化小膠質(zhì)細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)棕褐色的標(biāo)記物。主要密集分布在脊髓背角第Ⅰ、Ⅱ板層。組內(nèi)比較，IP組大鼠脊髓背角IBA-1陽性細(xì)胞術(shù)后第3d比術(shù)后第1d和第7d明顯增多(P＜0.01)。與IP組比較，在術(shù)后第1dNT+IP組大鼠IBA-1陽性細(xì)胞明顯增多(P＜0.01)，在術(shù)后第3d和第7dNT+IP組大鼠IBA-1陽性細(xì)胞也增多（P＜0.01）。
　　 結(jié)論:
　　 尼古丁依賴-戒斷引起大鼠脊髓

15、背角小膠質(zhì)細(xì)胞活化，小膠質(zhì)細(xì)胞活化參與了尼古丁戒斷切口痛大鼠術(shù)后痛覺過敏的形成。
　　 第四部分：尼古丁戒斷切口痛大鼠術(shù)后切口周圍組織中IL-1β水平的變化
　　 目的:
　　 探討切口周圍組織中IL-1β在尼古丁戒斷切口痛大鼠術(shù)后痛覺過敏中的作用。
　　 方法:
　　 SD大鼠96只，隨機(jī)分成4組:①正常對(duì)照組(Na(i)ve組，n=6)，在正常條件下飼養(yǎng)，不做任何處理;②尼古丁戒斷組(NT組，

16、n=30)，大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，于每天5:00，13:00和21:00時(shí)皮下注射尼古丁3mg/kg，3次/d，連續(xù)7d。③切口痛組(IP組，n=30)，大鼠在正常條件下飼養(yǎng)7d后，根據(jù)Brennan等方法制作大鼠切口痛模型;④尼古丁戒斷切口痛組(NT+IP組，n=30)，大鼠在正常條件下飼養(yǎng)，于每天5:00，13:00和21:00時(shí)皮下注射尼古丁3mg/kg，3次/d，連續(xù)7d。于第7d末根據(jù)Brennan等方法制作大鼠切口痛模型。N

17、T組、IP組和NT+IP組大鼠按術(shù)前2h、術(shù)后2h、術(shù)后24h、術(shù)后48h和術(shù)后72h再分為5個(gè)亞組，每個(gè)亞組6只。分別于術(shù)后2h、24h、48h和72h進(jìn)行疼痛行為學(xué)測(cè)試;于術(shù)前2h、術(shù)后2h、24h、48h和72h處死大鼠，取材皮膚切口周圍皮膚組織，通過ELISA法檢測(cè)大鼠皮膚組織中IL-1β的含量。
　　 結(jié)果:
　　 1.尼古丁戒斷切口痛大鼠疼痛行為學(xué)變化
　　 (1)尼古丁戒斷切口痛大鼠足底MWT的變化

18、
　　 與Na(i)ve組大鼠相比，IP組大鼠從術(shù)后2h開始，其MWT開始下降(P＜0.05)，至術(shù)后第48hMWT達(dá)最低（P＜0.01），到術(shù)后第72h開始好轉(zhuǎn)。與IP組相比，NT+IP組術(shù)后2h、24h、48h、72h其MWT顯著降低（P＜0.05），以術(shù)后48hMWT降低最為顯著(P＜0.01)。
　　 (2)尼古丁戒斷切口痛大鼠足底TWL的變化
　　 與Na(i)ve組大鼠比較，IP組大鼠術(shù)后2hTWL開

19、始下降(P＜0.05)，至術(shù)后48hTWL達(dá)最低值(P＜0.01)，到術(shù)后第72h開始好轉(zhuǎn)。與IP組比較，NT+IP組術(shù)后2h和24hTWL雖然降低，但沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，術(shù)后48h和72hTWL明顯縮短（P＜0.05），以術(shù)后48hTWL縮短最為顯著（P＜0.01）。
　　 2.尼古丁戒斷切口痛大鼠切口周圍皮膚組織中IL-1β的變化
　　 與IP組術(shù)前2h(11.52±0.35pg/mg)比較，NT組大鼠在各時(shí)間點(diǎn)切口周圍

20、組織中IL-1β水平明顯增高(P＜0.01)，IP組大鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)均明顯升高(P＜0.01)，從術(shù)后2h(44.28±6.27pg/mg)開始升高，術(shù)后48h(111.83±8.24pg/mg)達(dá)高峰，術(shù)后72h開始回降。
　　 與IP組各時(shí)間點(diǎn)比較，NT+IP組大鼠在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)切口周圍組織中IL-1β水平明顯增高(P＜0.01)。
　　 與術(shù)前2h(19.69±1.86pg/mg)，NT+IP組大鼠切口周圍組織中IL