舒巴坦對(duì)CCI大鼠慢性神經(jīng)病理性痛和痛過(guò)敏的影響.pdf

1、目的:神經(jīng)病理性疼痛，是由神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性損害和功能障礙所激發(fā)或引起的疼痛，屬于一種慢性持續(xù)性疼痛，嚴(yán)重影響患者的身心健康和生存質(zhì)量。但是，神經(jīng)病理性痛的發(fā)病機(jī)制目前尚不十分清楚，臨床上也缺乏有效的治療方法。因此，深入探討神經(jīng)病理性痛的機(jī)制一直是疼痛研究和關(guān)注的熱點(diǎn)。
　　谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)。病理情況下，脊髓過(guò)度積聚的谷氨酸通過(guò)激活突觸前和突觸后的谷氨酸受體，參與脊髓水平傷害性信息的傳遞及痛覺(jué)過(guò)敏的形成。膠

2、質(zhì)細(xì)胞谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體-1(glialglutamate transpor-1，GLT-1)，主要分布在星形膠質(zhì)細(xì)胞上，它通過(guò)對(duì)細(xì)胞外液中谷氨酸的攝取，在維持細(xì)胞外液谷氨酸的穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮主要作用。已有研究表明，GLT-1功能或表達(dá)的下調(diào)，參與多種疼痛模型中痛及痛過(guò)敏的形成和維持，如坐骨神經(jīng)慢性縮窄性損傷（Chronic constriction injury ofthe sciatic nerve，CCI）模型，脊神經(jīng)結(jié)扎模型，化療藥物紫杉醇

3、所致藥物性疼痛模型等。并且，應(yīng)用基因轉(zhuǎn)染的方法上調(diào)GLT-1的表達(dá)，可有效緩解內(nèi)臟痛。因此，尋找理想的GLT-1的激動(dòng)劑，上調(diào)GLT-1的表達(dá)和功能，可能成為治療慢性神經(jīng)病理性痛的潛在靶點(diǎn)。
　　我室既往的研究發(fā)現(xiàn)，β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素頭孢曲松鈉可以通過(guò)上調(diào)大鼠脊髓后角GLT-1的表達(dá)，增強(qiáng)其對(duì)谷氨酸的攝取而發(fā)揮抗CCI大鼠慢性神經(jīng)病理性痛過(guò)敏的作用。這一發(fā)現(xiàn)，為神經(jīng)病理性痛的防治研究提供了新的線索。但是直接將頭孢曲松鈉用于臨床防治

4、神經(jīng)病理性痛仍面臨很多問(wèn)題，如大劑量長(zhǎng)期使用會(huì)導(dǎo)致機(jī)體的菌群失調(diào)，或產(chǎn)生細(xì)菌耐藥等。繼續(xù)尋找既能發(fā)揮頭孢曲松鈉抗傷害性感受作用，又可以避免其副作用的替代品，對(duì)于上述研究成果的臨床應(yīng)用轉(zhuǎn)化具有重要的意義。
　　舒巴坦（sulbactam），屬于非典型β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素，其結(jié)構(gòu)與頭孢曲松鈉相似，都具有β-內(nèi)酰胺環(huán)，故推測(cè)其可能發(fā)揮與頭孢曲松鈉相似的抗傷害性感受作用。并且，單獨(dú)應(yīng)用舒巴坦無(wú)抗菌活性，可避免長(zhǎng)期應(yīng)用抗生素所產(chǎn)生的副作用。因

5、此，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)椎管內(nèi)給予舒巴坦，觀察了舒巴坦對(duì)CCI大鼠慢性神經(jīng)病理性痛過(guò)敏的影響，以及對(duì)CCI大鼠脊髓后角GLT-1表達(dá)的影響，以期進(jìn)一步為臨床上預(yù)防和治療神經(jīng)病理性痛的研究提供新的線索和依據(jù)。
　　方法:選用健康雄性Sprague-Dawley大鼠170只，體重280±20克，隨機(jī)分為以下4組:
　　①CCI組(n=31):行大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)CCI術(shù)，于術(shù)前1d，術(shù)后1d、5d、9d、13d、17d、21d測(cè)定大鼠熱縮足

6、反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值。
　?、赟ham組(n=23):行大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)CCI術(shù)的假手術(shù)（僅暴露其右側(cè)坐骨神經(jīng)而不進(jìn)行結(jié)扎處理），其他處理同CCI組。
　?、跜CI+舒巴坦預(yù)防組(n=33):于CCI術(shù)后當(dāng)天開(kāi)始椎管內(nèi)連續(xù)注射舒巴坦，每日一次，連續(xù)5d。根據(jù)劑量分為150 nmol，225 nmol，300 nmol，400 nmol和800 nmol5個(gè)亞組。其它處理同CCI組。同時(shí)設(shè)生理鹽水(Normalsali

7、ne，NS)對(duì)照組，椎管內(nèi)注射N(xiāo)S。
　?、蹸CI+舒巴坦治療組(n=25):于CCI術(shù)后9d開(kāi)始椎管內(nèi)連續(xù)注射舒巴坦，每日一次，連續(xù)5 d。根據(jù)劑量分為300 nmol，400 nmol和800 nmol3個(gè)亞組。其它處理同CCI組。同時(shí)設(shè)NS對(duì)照組，椎管內(nèi)注射N(xiāo)S。
　　上述各組大鼠于規(guī)定時(shí)間點(diǎn)取材:Sham組和CCI組分別于術(shù)后5d、9d、13d、17d和21d取大鼠腰4至腰6(L4-L6)節(jié)段右側(cè)脊髓后角，舒巴坦預(yù)防

8、組（800 nmol亞組）于術(shù)后5d、9d、13d取L4-L6節(jié)段右側(cè)脊髓后角，舒巴坦治療組（800 nmol亞組）于術(shù)后13d、17d、21d取L4-L6節(jié)段右側(cè)脊髓后角，應(yīng)用western blot法觀察脊髓后角GLT-1表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:
　　1、舒巴坦對(duì)CCI大鼠慢性神經(jīng)病理性痛和痛過(guò)敏的影響
　　Sham組大鼠手術(shù)側(cè)后肢熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值與術(shù)前相比，在所觀測(cè)的各時(shí)間點(diǎn)均無(wú)明顯的變化。與s

9、ham組相比，CCI術(shù)后1d熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值無(wú)明顯變化，術(shù)后5 d CCI側(cè)后肢熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值開(kāi)始顯著下降（P＜0.05），9d時(shí)下降達(dá)到低谷，持續(xù)到所測(cè)試的21 d(P＜0.05)，表明CCI誘導(dǎo)大鼠產(chǎn)生了熱和機(jī)械性痛覺(jué)過(guò)敏。與CCI組相比，預(yù)防性地給予舒巴坦150nmol，225 nmol，300 nmol，400 nmol和800 nmol后，大鼠CCI側(cè)后肢熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值

10、于術(shù)后5d、9d、13d、17d和21d均無(wú)顯著改善(P＞0.05)。與CCI組相比，治療性地給予舒巴坦300 nmol，400 nmol和800 nmol后，大鼠CCI側(cè)后肢熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值在術(shù)后13d、17d和21d也均無(wú)顯著改善(P＞0.05)。椎管內(nèi)注射N(xiāo)S對(duì)CCI大鼠的熱縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值無(wú)顯著影響（P＞0.05）。
　　2、舒巴坦對(duì)CCI大鼠脊髓后角GLT-1表達(dá)的影響
　　Wes

11、tern blot的結(jié)果顯示，Sham組大鼠脊髓后角可見(jiàn)一定量GLT-1蛋白的基礎(chǔ)表達(dá)。與sham組相比，CCI組大鼠術(shù)后5d、9d、13d、17d、21d脊髓后角GLT-1的表達(dá)均顯著下降，表現(xiàn)為GLT-1與β-actin的IOD值的比值降低(P＜0.05)。與CCI組相比，預(yù)防性地給予舒巴坦800 nmol后，可顯著上調(diào)CCI大鼠術(shù)后5d時(shí)脊髓后角GLT-1的表達(dá)，表現(xiàn)為GLT-1與β-actin的IOD值的比值顯著增高(P＜0.0

12、5)，但術(shù)后9d、13d時(shí)，GLT-1的水平又重新回落，與CCI組相比，無(wú)顯著差異(P＞0.05)。而治療性地給予舒巴坦800 nmol后，與CCI組相比，大鼠術(shù)后13d、17d及21d脊髓后角GLT-1的表達(dá)均無(wú)顯著性變化(P＞0.05)。椎管內(nèi)注射N(xiāo)S對(duì)CCI大鼠脊髓后角GLT-1的表達(dá)無(wú)顯著影響。
　　結(jié)論:
　　1、預(yù)防性給予舒巴坦，可上調(diào)CCI術(shù)后5d大鼠脊髓后角GLT-1的表達(dá)，但術(shù)后9d，13 d GLT-1的