PARP在大鼠腰5脊神經(jīng)結(jié)扎所致神經(jīng)病理性痛中的作用.pdf

1、研究目的
　　以往的研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)損傷和炎癥誘導(dǎo)的DRG和脊髓背角DNA甲基化和組蛋白乙酰化，即所謂的表觀遺傳學(xué)，通過調(diào)控相關(guān)基因的轉(zhuǎn)錄，在病理性痛的發(fā)生和發(fā)展過程發(fā)揮重要作用。聚 ADP-核糖聚合酶（ poly(ADP-ribose) polymerase, PARP）是廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi)的一組酶蛋白，其通過對相關(guān)核蛋白聚ADP-核糖基化的修飾參與基因轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控。但迄今PARP在神經(jīng)病理性痛中的作用及表達(dá)變化仍不清楚。本研究

2、首先通過鞘內(nèi)注射 PARP抑制劑以觀察PARP激活在大鼠腰5脊神經(jīng)結(jié)扎（Lumbar5 spinal nerve ligation, L5 SNL）引起的神經(jīng)病理性痛中的作用，而后利用 Western Blot法進(jìn)一步觀察大鼠 L5 SNL后不同時間脊髓背角PARP-1的表達(dá)變化。
　　研究方法
　　本實驗采用由鄭州大學(xué)動物實驗中心提供的體重在200-300g之間的雄性Sprague-Dawley大鼠。通過腰五脊神經(jīng)結(jié)扎（L

3、5 SNL）制備神經(jīng)病理性痛模型，假手術(shù)組僅暴露腰5脊神經(jīng)后關(guān)閉切口。采用預(yù)先鞘內(nèi)置管微量注射PARP抑制劑 PJ34，對照組注射等體積的溶劑。通過測定大鼠機械刺激撤足閾值（Paw withdrawal threshold, PWT）和熱刺激撤足潛伏期（Paw withdrawal latency, PWL）評價 PJ34對大鼠痛行為的影響。大鼠痛行為學(xué)測試實驗分6組：①sham組；②L5 SNL+saline組；③L5 SNL+PJ3

4、41μg組;④L5 SNL+PJ345μg;⑤L5 SNL+PJ3410μg;⑥sham+PJ3410μg。鞘內(nèi)注射PJ34或saline于鞘內(nèi)置管后，SNL之前開始，每天1次，共7天。為了觀察PJ34對已經(jīng)建立起的神經(jīng)病理性痛的影響，鞘內(nèi)注射藥物于L5 SNL后第7天開始，每天1次，共3天，實驗設(shè)兩組：①L5 SNL+saline組；②L5 SNL+PJ3410μg組。為觀察大鼠L5 SNL后脊髓背角PARP-1的表達(dá)變化，將18只S

5、D大鼠隨機分為六組，每組三只，sham組行假手術(shù)，其余各組分別于SNL術(shù)后1、5、7、10、14天取材，取左側(cè)脊髓腰膨大處，測蛋白濃度，用western blot測PARP-1的表達(dá)。
　　研究結(jié)果
　　1大鼠L5 SNL后脊髓背角PARP-1的表達(dá)變化
　　PARP-1為PARP家族的主要活性形式，本研究通過Western Blot法觀察了L5 SNL后第1、5、7、10、14天脊髓背角PARP-1的蛋白表達(dá)變化，結(jié)

6、果發(fā)現(xiàn)L5 SNL能引起脊髓PARP-1蛋白的表達(dá)上調(diào)，與假手術(shù)組比較，顯著性差異出現(xiàn)于術(shù)后第1天（P<0.05），第7天達(dá)高峰（P<0.01），至術(shù)后的第14天，仍維持表達(dá)。這與L5 SNL后的痛覺變化規(guī)律是一致的。
　　2預(yù)先鞘內(nèi)注射（Introthecal injection, i.t.）PARP抑制劑PJ34對L5 SNL后大鼠神經(jīng)病理性痛形成過程的影響
　　大鼠L5 SNL后PWT和PWL明顯下降，與假手術(shù)組以及b

7、aseline比較比較，顯著性差異出現(xiàn)于術(shù)后第1天（P<0.05），術(shù)后第7天達(dá)最低值（P<0.001）；預(yù)先鞘內(nèi)注射PJ34能預(yù)防L5 SNL后大鼠PWT和PWL的下降，與鞘內(nèi)注射溶劑組比較，顯著性差異出現(xiàn)在PJ34應(yīng)用后的第3天（P<0.05），并且，測試持續(xù)至L5 SNL后的第14天依舊有效，PJ34的作用呈劑量依賴性。單獨鞘內(nèi)注射PJ34對正常大鼠基礎(chǔ)PWT和PWL沒有影響。
　　3鞘內(nèi)注射PJ34對L5 SNL后已經(jīng)建立

8、起的神經(jīng)病理性痛的影響
　　為觀察PARP抑制劑PJ34對已經(jīng)建立起的神經(jīng)病理性痛的影響，實驗選擇L5 SNL后第7天開始鞘內(nèi)注射PJ34，每天1次，持續(xù)3天，結(jié)果發(fā)現(xiàn)PJ34能部分逆轉(zhuǎn)L5 SNL引起的PWT和PWL的下降。與注射saline組比較，顯著性差異出現(xiàn)在用藥后的第1天（P<0.05），停止注藥后測試，依舊有效。
　　研究結(jié)論
　　大鼠L5 SNL可引起脊髓背角PARP-1表達(dá)升高，PARP抑制劑PJ34能