2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、目的: EphBs受體及ephrinBs配體存在于成年的大腦及外周組織中,在各種病理、生理性疼痛中具有重要作用。我們及其他實(shí)驗(yàn)室的研究已經(jīng)證明脊髓水平ephrinBs/EphBs信號(hào)參與了傷害性信息的調(diào)制及中樞敏化。然而,ephrinBs/EphBs信號(hào)在外周敏化中的作用尚不清楚。本研究的同的是探討外周ephrinBs/EphBs受體信號(hào)在痛覺過敏中的作用及其機(jī)制。 方法: 1.為觀察外周注射EphrinB1-Fc是否引

2、起劑量依賴性的痛覺過敏,足底注射不同劑量的ephrinB1-Fc(0.02,0.1,0.5-ug,溶于10ul生理鹽水中);為觀察EphrinB1-Fc的效應(yīng)是否由EphB受體介導(dǎo),EphB1-Fc(0.5-ug)在注射ephrinB1-Fc(0.5-ug)30分鐘前給予,然后觀察EphrinB1-Fc注射后30分鐘內(nèi)小鼠自發(fā)痛行為,注射后30分鐘,1,2,4,8,24,48小時(shí)熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值。同時(shí)采用免疫組織化學(xué)方

3、法檢測(cè)ephrinB1-Fc(0.5-ug)注射1小時(shí)后脊髓背角神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)。 2.為觀察外周注射EphrinB1-Fc是否劑量依賴性激活皮膚磷酸化MAPKs,足底注射不同劑量的ephrinB1-Fc(0.02,0.1,0.5-ug);為觀察外周注射EphrinB1-Fc引起皮膚磷酸化MAPKs激活的時(shí)間依賴性,足底注射ephrinB1-Fc(0.5-ug),采用Western blot方法檢測(cè)ephrinB1-Fc注射

4、后10分鐘,30分鐘,2,8,24,48小時(shí)及免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)ephrinB1-Fc注射后30分鐘皮膚p-ERK、p-JNK、p-p38表達(dá)。 3.為觀察MAPKs抑制劑對(duì)EphrinB1-Fc引起的痛行為表達(dá)的影響,EphrinB1-Fc0.5μg注射前30分鐘,注射不同劑量MAPKs抑制劑(ERK抑制劑U0126、JNK抑制劑SP600125、p38抑制劑SB203580,0.02,0.1,0.5-μg溶于10μl 1%

5、的二甲亞砜中),觀察EphrinB1-Fc注射后30分鐘內(nèi)小鼠自發(fā)痛行為,注射后1,2,4,8,24小時(shí)熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值:為觀察MAPKs抑制劑對(duì)EphrinB1-Fc引起的痛行為維持的影響,在注射EphrinB1-Fc0.5μg 1小時(shí)后給予MAPKs抑制劑,觀察注射抑制劑后30分鐘,1,2,4,8小時(shí)熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值。同時(shí)采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)末次給藥后一小時(shí)脊髓背角神經(jīng)元Fos蛋白表達(dá)。

6、 4.為研究脊髓水平MAPKs在ephrinB1-Fc引起的痛覺過敏中的作用,采用Western blot方法檢測(cè)ephrinB1-Fc注射后30分鐘內(nèi)脊髓p-ERK、p-JNK、p-p38的含量;為觀察MAPKs對(duì)ephrinB1-Fc引起的痛行為表達(dá)及維持的影響,在注射EphrinB1-Fc0.5μg前30分鐘或一小時(shí)后鞘內(nèi)給予MAPKs抑制劑,觀察未次給藥后1,2,4,8小時(shí)熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值。 5.為觀

7、察EphB受體是否參與福爾馬林引起的外周MAPKs的激活,在注射福爾馬林(2%,10μl)前30分鐘,于同一部位注射EphB1-Fc(0.5-ug),記錄注射福爾馬林后0~5 min和15~30 min的累積舔足時(shí)間和縮足反應(yīng)次數(shù),免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)福爾馬林注射后30min內(nèi)皮膚p-p38,p-ERK,p-JNK表達(dá)及一小時(shí)后脊髓Fos蛋白表達(dá)。 6.為觀察NMDA受體是否參與了EphrinB1-Fc引起的MAPKs的激活,注

8、射ephrinB1-Fc(0.5-ug)前30分鐘注射NMDA受體抑制劑MK801(2.5-μg),Westernblot方法觀察ephrinB1-Fc注射后30分鐘內(nèi)皮膚p-ERK、p-JNK、p-p38的表達(dá)及30分鐘,1,2,4,8小時(shí)熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值。 結(jié)果: 1.不同劑量ephB受體興奮劑ephrinB1-Fc注射于小鼠右足底,注射后30分鐘小鼠的熱縮足反射潛伏期及機(jī)械縮足反射閾值呈劑量依賴性

9、降低,至少持續(xù)到8小時(shí),24小時(shí)后趨于正常;ephrinB1-Fc在注射后30分鐘內(nèi),劑量依賴性增加小鼠舔足時(shí)間和舔足次數(shù);足底注射ephB受體抑制劑ephB1-Fc(0.5ug/10ul)未引起小鼠痛行為及基礎(chǔ)痛閩的改變,預(yù)先注射ephB1-Fc能部分阻斷ephfinB1-Fc引起的痛行為;i.p1.ephrinB1-Fc(0.5-μg)能夠引起同側(cè)脊髓背角淺層Fos蚩白表達(dá)增加,且被EphB1-Fc阻斷。 2.與行為學(xué)結(jié)果一致,ep

10、hfinB1-Fc皮下注射10分鐘皮膚內(nèi)p-ERK、p-JNK表達(dá)顯著增加,30分鐘內(nèi)p-p38表達(dá)顯著增加。磷酸化MAPK的表達(dá)在注射后2小時(shí)趨于正常,磷酸化MAPK的表達(dá)與ephrinB1-Fc呈劑量依賴性。免疫組化結(jié)果也顯示皮膚pMAPKs表達(dá)增加。 3.預(yù)先注射p38抑制劑SB203580,ERK抑制劑U0126,JNK抑制劑SP600125(每種抑制劑0.02,0.1,0.5ug均溶于1%的DMSO內(nèi))能阻斷ephri

11、nB1-Fc引起的痛覺異常并縮短舔足時(shí)間,且呈劑量依賴性;皮下注射ephfinB1-Fc 1小時(shí)后注射MAPKs抑制劑,3種MAPKs抑制劑均能逆轉(zhuǎn)ephrinB1-Fc引起的痛行為,并且至少持續(xù)至注射抑制劑后8小時(shí);預(yù)先注射抑制劑或ephrinB1-Fc注射1小時(shí)后注射抑制劑,均能減少ephrinB1-Fc引起的脊髓水平Fos蛋白表達(dá)。 4.足底注射ephrinB1-Fc增加脊髓水平MAPKs的表達(dá),預(yù)先鞘內(nèi)注射抑制劑或eph

12、rinB1-Fc注射1小時(shí)后注射抑制荊,能阻斷或逆轉(zhuǎn)ephrinB1-Fc引起的痛覺過敏。 5.預(yù)先注射EphB1-Fc,減少福爾馬林引起的舔足時(shí)間,縮足反應(yīng)次數(shù)及脊髓Fos蛋白、皮膚p-p38,p-ERK,p-INK表達(dá)。 6.預(yù)先注射MK801能夠阻斷EphrinB1-Fc引起的熱痛覺過敏、機(jī)械性痛覺異常及皮膚MAPKs激活。 結(jié)論: 1.激活外周ephrinBs/EphBs信號(hào)產(chǎn)生MAPK介導(dǎo)的痛覺

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