化療藥物順鉑引起HBV再激活的體外試驗(yàn)及其機(jī)制研究.pdf

1、乙型病毒性肝炎是一個(gè)影響全世界人們健康的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題。全球約有20億人感染HBV，其中約4億為HbsAg陽(yáng)性的慢性感染者,而這類(lèi)人群的3/4是來(lái)源于中國(guó)。通常情況下，慢性HBV感染者和無(wú)癥狀HBV攜帶者極少發(fā)生HBV再激活現(xiàn)象，但若接受腫瘤化療或免疫抑制治療時(shí)，則很有可能使靜息狀態(tài)或是低復(fù)制狀態(tài)的HBV活化；病毒的大量復(fù)制使肝功能受到損傷，從而導(dǎo)致急性肝炎、急性重癥肝炎、急性肝衰竭等嚴(yán)重的臨床問(wèn)題。
　　但是，目前腫瘤患者接受

2、化療后HBV再激活的機(jī)制尚不清楚；比較公認(rèn)的有兩種機(jī)制可以解釋該現(xiàn)象。其一，引發(fā)HBV再激活的抗腫瘤藥物大致可分為2類(lèi)：傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性藥物及與抗B、T細(xì)胞單克隆抗體治療相關(guān)的生物制劑，這些藥物多具有較強(qiáng)的免疫抑制效果；而機(jī)體的免疫力是抑制病毒復(fù)制和感染的最核心因素，當(dāng)機(jī)體免疫力受到抑制時(shí)病毒的復(fù)制自然就增強(qiáng)了。其二，部分免疫抑制劑和化療藥物可以直接的促HBV復(fù)制。HBVDNA中含有糖皮質(zhì)激素的作用元件，該類(lèi)藥物可以直接作用于HBV增強(qiáng)子

3、Ⅰ，促進(jìn)HBV基因的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制。但是很少有研究報(bào)道化療藥物對(duì)HBV復(fù)制有無(wú)直接促進(jìn)作用。
　　本實(shí)驗(yàn)選擇了三種臨床常見(jiàn)的化療藥物：順鉑、長(zhǎng)春新堿、表柔比星，分別將其直接添加在HBV復(fù)制的穩(wěn)定細(xì)胞系中（HepG2-HBV1.1和HepG2.2.15），通過(guò)Southern-blot和qRT-PCR法證實(shí)藥物處理組的細(xì)胞內(nèi)及上清中的HBVDNA拷貝量比對(duì)照組明顯增加（P<0.05）；Western-blot方法檢測(cè)到藥物處理組的細(xì)胞內(nèi)

4、的HBc-Ag表達(dá)比對(duì)照組明顯增加（P<0.05）；ELISE方法檢測(cè)到藥物處理組的細(xì)胞內(nèi)的HBs-Ag、細(xì)胞上清中HBe-Ag和來(lái)自于HBV核心顆粒的HBc-Ag表達(dá)增加（P<0.05）；但上清中HBs-Ag及自于Dane顆粒的HBc-Ag表達(dá)量與對(duì)照組無(wú)明顯差異（P>0.05）。然后，以順鉑為代表研究其促HBV復(fù)制的機(jī)制。流式細(xì)胞術(shù)、免疫組化、BrdU、臺(tái)盼藍(lán)染色等方法提示順鉑處理細(xì)胞早期會(huì)使細(xì)胞產(chǎn)生大量的ROS,同時(shí)會(huì)引起細(xì)胞增殖

5、抑制和細(xì)胞周期S期阻滯。通過(guò)RT-PCR和qRT-PCR證實(shí)，順鉑處理后能使HBV轉(zhuǎn)錄因子水平普遍增高，且以PGC-1α及HNF-4α的增長(zhǎng)最為明顯（P<0.05）。雙熒光素酶試驗(yàn)提示提示順鉑處理細(xì)胞后，HBV的核心啟動(dòng)子Cp、前S1（Sp1）和前S2/S（Sp2）啟動(dòng)子活力增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，順鉑等化療藥物在體外試驗(yàn)中可以直接促進(jìn)HBV的復(fù)制，其機(jī)制可能是通過(guò)誘導(dǎo)體內(nèi)ROS的產(chǎn)生，導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷及周期阻滯，使細(xì)胞內(nèi)的養(yǎng)分和細(xì)胞器被