順鉑誘導HBV再激活和肝細胞損傷的分子機制研究.pdf

1、乙型病毒性肝炎是一種嚴重威脅人類健康的重要公共衛(wèi)生問題，據(jù)世界衛(wèi)生組織報道，全世界約20億人曾感染過HBV，其中近4億成為HBsAg陽性的慢性攜帶者，而其中的3/4是來源于中國；全球每年因HBV感染所致死的近100萬，其中約半數(shù)在中國。同時據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計，癌癥是目前人類最主要的死亡原因之一；而這些腫瘤患者合并有HBV感染的數(shù)目也極其龐大，當這些患者在接受化療或免疫抑制劑治療時，其中部分患者會發(fā)生HBV再激活的現(xiàn)象，大量瞬時活化的HB

2、V則可能導致機體出現(xiàn)嚴重的肝功能損傷甚至是肝衰竭，從而引起治療減緩或是中斷，繼而耽誤腫瘤患者的有效治療，必將嚴重影響其預后甚至是危及其生命。
　　近年來，國內(nèi)外已有多項臨床實驗證實順鉑等化療藥物可以誘導HBV再激活，從而引起HBV復制增強，同時伴隨急性肝功能損傷或肝衰竭的危象，導致病死率急劇上升。但是順鉑誘導HBV再激活的分子機制至今仍不清楚。本研究中，我們首先在體外成功構建了基于環(huán)化自連的HBV DNA(circularized

3、 HBV DNA)感染的細胞和動物模型，并通過與線性HBV DNA感染模型比較，發(fā)現(xiàn)circularized HBV DNA的感染效率和復制水平明顯優(yōu)于線性的HBV DNA(P<0.05)，由于circularized HBV DNA在結構上完全等同于HBV cccDNA，因而在沒有外源載體DNA的干擾下，可以更加真實地反應HBV感染的基本病理生理過程；進而為下一步的實驗研究及HBV慢性持續(xù)感染的機制和抗病毒的治療提供強有力的依據(jù)。其次

4、，我們分別在體內(nèi)和體外證實：順鉑一方面可以通過直接上調(diào)HBV復制相關轉錄因子PGC-1α和HNF-4α的表達，從而增強HBV核心啟動子活性，繼而在轉錄水平上調(diào)HBV的復制；另一方面可以直接上調(diào)HBV cccDNA的表達，從而導致HBV DNA水平顯著增加。最后，我們通過RT-PCR、Western-blot、BrdU、siRNA和流式細胞術等實驗證實，DDP誘導HBV再激活致肝細胞損傷的分子機制主要通過以下兩個途徑來完成：其一，順鉑可以

5、直接誘導肝細胞氧化應激（ROS水平上調(diào)），并抑制其細胞的增殖從而阻滯于S期；高氧化狀態(tài)下的內(nèi)環(huán)境導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，從而引發(fā)未折疊蛋白反應，當UPR超載時，誘發(fā)細胞凋亡，參與急性肝細胞損傷甚至肝功能衰竭的病理生理過程；其二，順鉑顯著上調(diào)細胞Alix蛋白表達，并增加HBV核心顆粒的直接釋放，顯著增加的HBcAg有可能作為一種強免疫原，從而激發(fā)機體發(fā)生強烈的免疫反應，繼而導致急性肝細胞損傷及肝衰竭；同時姜黃素和NAC可以成功規(guī)避在臨床上由順鉑所