順鉑對MCF-7細(xì)胞DNA損傷分子機(jī)制的初步研究.pdf

1、乳腺癌是人類常見的一種惡性腫瘤，也是女性主要惡性腫瘤之一。目前化療仍是乳腺癌治療的主要途徑。順鉑(cisplatin，DDP)是治療乳腺癌最有效的化療藥物之一，它是臨床上廣泛應(yīng)用的一種抗癌藥物，對多種惡性腫瘤的治療有作用。本研究以乳腺癌細(xì)胞株MCF-7作為研究對象，研究DDP誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞DNA損傷修復(fù)通路中相關(guān)蛋白的表達(dá)變化，探討DDP對DNA損傷修復(fù)通路作用的分子機(jī)制。
　　 通過MTT檢測DDP對乳腺癌細(xì)胞生長的影響，

2、確定其IC50值。IC50值對應(yīng)的藥物濃度作用乳腺癌細(xì)胞MCF-7不同的時間后，免疫熒光組織化學(xué)結(jié)果顯示，DDP作用MCF-7細(xì)胞6h后即有DNA雙鏈斷裂標(biāo)記分子γ-H2AX出現(xiàn)，同時采用Western blotting方法，在蛋白水平也檢測到γ-H2AX隨著DDP作用時間的增加有上調(diào)的趨勢。RT-PCR驗證除了atm、chk2基因外，其他DNA損傷修復(fù)相關(guān)基因，如p53、p21、p27在DDP作用于MCF-7細(xì)胞株后都有表達(dá)上調(diào)的趨勢

3、。采用Western blotting技術(shù)檢測DDP干預(yù)后DNA損傷修復(fù)相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)磷酸化的ATM、Chk2和對照組相比蛋白表達(dá)水平顯著上調(diào)。而P53、P27、P21蛋白表現(xiàn)出先上調(diào)后下調(diào)的趨勢，與基因水平的表達(dá)不一致，推測有可能是隨著藥物作用時間的增加，細(xì)胞發(fā)生凋亡，在此過程中使得細(xì)胞內(nèi)一些重要蛋白發(fā)生降解。因此，我們進(jìn)一步對DDP作用后乳腺癌細(xì)胞MCF-7進(jìn)行細(xì)胞凋亡的研究，通過hochest33258染色及Casp