間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)免疫抑制性中性粒細(xì)胞促腫瘤發(fā)展.pdf

1、目的:
　　研究小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與中性粒細(xì)胞共培養(yǎng)后,中性粒細(xì)胞對T細(xì)胞免疫的影響,并探索其分子機(jī)制,以及共培養(yǎng)誘導(dǎo)后的中性粒細(xì)胞對小鼠4T1腫瘤進(jìn)展的影響。
　　方法:
　　(1)通過體外分離培養(yǎng)與提純小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,骨髓中性粒細(xì)胞。
　　(2)通過體外共培養(yǎng)體系,Annexin-V-PI標(biāo)記,流式細(xì)胞儀檢測中性粒細(xì)胞凋亡情況。
　　(3)體外共培養(yǎng)后中性粒細(xì)胞影響T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn):通過Anti-

2、CD3抗體刺激T淋巴細(xì)胞增殖,并用CFSE檢測其增殖率,同時檢測部分T細(xì)胞激活Marker(CD25、CD69、CD62L、CD44)。
　　(4)采用基因芯片和RT-PCR研究處理組和未處理組轉(zhuǎn)錄水平情況。檢測各組中性粒細(xì)胞精氨酸酶1活性水平。
　　(5)小鼠體內(nèi)注射共培養(yǎng)的中性粒細(xì)胞與4T1小鼠腫瘤細(xì)胞建造腫瘤模型,記錄腫瘤體積生長趨勢。
　　結(jié)果:
　　(1)通過CD45、CD11b雙陰選,CD11b、 L

3、y-6G雙陽選分別能夠得到所需間充質(zhì)干細(xì)胞、中性粒細(xì)胞。
　　(2)共培養(yǎng)后中性粒細(xì)胞的生存時間更長,凋亡率減少。
　　(3)在體外經(jīng)過MSC處理的PMN能夠抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和激活。
　　(4)共培養(yǎng)組精氨酸活性上調(diào),轉(zhuǎn)錄水平上iNOS、 saa3、IL-10、IL-10R等免疫抑制基因上調(diào)。
　　(5)腫瘤模型示實(shí)驗(yàn)組4T1腫瘤體積增長比對照組迅速。
　　結(jié)論:
　　(1)在體外小鼠骨髓間充質(zhì)干