免疫抑制劑FK506對人骨髓間充質(zhì)干細胞體內(nèi)外成骨誘導作用研究.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩42頁未讀 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、體內(nèi)外成骨誘導作用研究研究目的分離、擴增和鑒定人骨髓間充質(zhì)干細胞(Bone Marrow-deftved MesenchymalStem Cells,);研究免疫抑制劑FK506對MSCs的體外成骨細胞分化誘導,及對人骨髓間充質(zhì)干細胞/β-磷酸三鈣復合物(MSCs/β-TCP)的體內(nèi)成骨促進作用,探索FK506作為一個新型骨生長因子在臨床的潛在用途。 材料與方法: 第一部分 聯(lián)合利用密度梯度離心和差異貼壁法分離M

2、SCs擴增傳代,相差顯微鏡形態(tài)學觀察和流式細胞儀檢測細胞表面標記CD13、CD29、HLA-2、CD34、CD45和HLA-DR。分別在定向誘導培養(yǎng)劑培養(yǎng)下向成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞分化。 第二部分 MSCs按實驗目的隨機分組,(1)對照組:生長培養(yǎng)液中加入L-抗壞血酸-2-磷酸(AsAp)和β-甘油磷酸(β-GP);(2)FK506處理組:在對照組基礎(chǔ)上加入50nmol/L FK506。分別于誘導培養(yǎng)第4,8,12

3、,16天時行堿性磷酸酶(APase)活性,鈣含量測定和骨鈣素mRNA Northern印跡分析。 第三部分 將MSCs在低壓下載入多孔β-TCP立方塊,形成MSCs/β-TCP復合物,電鏡觀察材料與細胞結(jié)合情況和細胞生長情況;隨機分組:(1)對照組:生長培養(yǎng)液中加入和β-甘油磷酸(β-GP);(2)FK506處理組:在對照組基礎(chǔ)上加入50nmol/L FK506。繼續(xù)誘導培養(yǎng)2周后植入裸鼠背部皮下,于植入4周和8周后取出

4、復合物作組織學檢查新骨生成。 結(jié)果: 第一部分 1.成功分離到原代細胞,外觀紡錘形和多角形,呈極性排列,集落呈漩渦狀。細胞傳代后保持成纖維細胞樣外觀。群體倍增時間約為26 h。P1、P4、P10細胞增殖速率無明顯差異。 2.流式細胞儀檢測,所分離的細胞均-地表達間充質(zhì)細胞表面標記物CD13、CD29,HLA-2,而造血系細胞表面標記物CD34、CD45和HLA-DR陰性。 3.多向分化研究證實,所

5、獲得的細胞能成功向成骨細胞分化,堿性磷酸酶鈣鈷法染色、鈣茜素紅染色和Ⅰ型膠原免疫組化陽性;能成功向軟骨細胞分化,Alcian藍染色和Ⅱ型膠原免疫組化陽性;能成功向脂肪細胞分化,油紅O染色陽性。 第二部分 1. FK506處理組細胞的堿性磷酸酶活性在培養(yǎng)第4,8,12,16天時均明顯高于對照組;而且隨著培養(yǎng)時間的增加,F(xiàn)K506處理組活性增加更明顯(培養(yǎng)第4天兩組相近,第16天時相差近10倍)。 2. FK506處

6、理組細胞的鈣含量在培養(yǎng)第8,12,16天時均明顯高于對照組;兩組培養(yǎng)物的鈣含量隨著培養(yǎng)時間增加差別更加明顯。 3.培養(yǎng)第12、14、16天時提取兩組培養(yǎng)物的總mRNA行骨鈣素Northem印跡分析,對照組的骨鈣素mRNA幾乎未能測出,而FK506處理組表達明顯。 第三部分 1.電鏡顯示細胞進入材料中心區(qū)域,貼附良好。植入4、8周后取出發(fā)現(xiàn)材料內(nèi)部細胞明顯增殖,且功能活躍。 2.組織學檢查發(fā)現(xiàn)MSCs/β-

7、TCP復合物組新骨生成量較對照組明顯多。 結(jié)論: 1.本研究所用方法能從人骨髓中高效分離和擴增MSCs,并從形態(tài)學和功能學上獲得鑒定。 2.β-TCP與MSCs生物相容性良好,F(xiàn)K506處理組植入體內(nèi)后新骨生成明顯較對照組好。 3.FK506能顯著促進人MSCs的體外成骨細胞分化和體內(nèi)繼續(xù)成骨,提示FK506可以在骨組織工程領(lǐng)域中作為骨生長因子,用于臨床提高骨移植修復骨缺損的療效,并加深目前對免疫抑制劑作

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論