免疫抑制劑Fk506對乳腺腫瘤細(xì)胞株的體外作用研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)利用FK506(Tacrolimus),對乳腺腫瘤細(xì)胞系MCF-7進(jìn)行體外作用研究,發(fā)現(xiàn)FK506可以抑制乳腺腫瘤細(xì)胞增殖;MTT結(jié)果顯示,24 h與48 h的半抑制濃度基本一致,說明其在較短時(shí)間內(nèi)即可發(fā)揮有效作用。細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察以及細(xì)胞染色表明,FK506沒有誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,而很可能是抑制了細(xì)胞的分裂。
　　 由于FK506的結(jié)合底物FKBP4(FK506 binding protein4)是免疫親和蛋白家族中的一員,主要

2、作用是作為輔分子伴侶,與固醇類受體形成復(fù)合體,幫助其折疊,穩(wěn)定以及轉(zhuǎn)運(yùn);同時(shí),它在細(xì)胞骨架的裝配以及細(xì)胞分裂器定位調(diào)節(jié)中也發(fā)揮了重要作用,因此,FK506抑制乳腺腫瘤細(xì)胞增殖有可能與FKBP4的功能有關(guān)。此外,腳手架蛋白GIPC1(GIPC PDZdomain containing family,member1),作為乳腺腫瘤細(xì)胞的重要分子標(biāo)記之一,是FKBP4一個(gè)潛在的相互作用蛋白。本實(shí)驗(yàn)室在先前的研究中發(fā)現(xiàn),在乳腺腫瘤干細(xì)胞中,存在

3、FKBP4與GIPC1共低表達(dá)現(xiàn)象,說明二者有可能存在功能相關(guān)性。還有實(shí)驗(yàn)表明,GIPC1與IGF1R結(jié)合,可以使之穩(wěn)定,進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制凋亡。因此,推測FK506是通過影響FKBP4與GIPC1相互作用,進(jìn)而破壞IGF1R的穩(wěn)定性而導(dǎo)致細(xì)胞增殖的抑制。然而免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)兩者之間存在相互作用,蛋白印跡也未檢測到IGF1R的含量與磷酸化狀態(tài)在藥物處理前后有明顯變化。這雖未揭示FK506的作用機(jī)制,但也暗示,雖然在固醇類受體介導(dǎo)

4、的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中,需要FKBP4的積極參與,但在作為膜受體代表的IGF1R信號(hào)通路里,FKBP4卻未呈現(xiàn)出相應(yīng)的作用。這從另一方面說明,FKBP4作為輔分子伴侶對其底物選擇具有一定的專一性,作用對象可能主要是位于核內(nèi)的固醇類受體,而非膜受體。
　　 經(jīng)雙向電泳(2-DE)蛋白質(zhì)表達(dá)圖譜和MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜分析,發(fā)現(xiàn)有17個(gè)蛋白在FK506處理細(xì)胞前后表達(dá)量發(fā)生明顯差異,并進(jìn)一步從中鑒定出12個(gè)蛋白。根據(jù)功能將這些蛋白分為