新型免疫抑制劑霉酚酸及霉酚酸酯的研制.pdf

1、對(duì)霉酚酸(MPA)及霉酚酸酯(MMF)的HPLC檢測(cè)、MPA的發(fā)酵及分離純化工藝和MMF的合成進(jìn)行了較系統(tǒng)的研究,并確定了MMF的化學(xué)結(jié)構(gòu). 建立了MPA并8MMF的定量分析方法-反相高效液相色譜法,確定了高效液相色譜法的條件,色譜柱為Diamonsil C8 150×4.6mm,5μm,檢測(cè)器為249nm,測(cè)定MPA的流動(dòng)相為乙腈:0.1﹪三氟乙酸水溶液=50:50,測(cè)定MMF的流動(dòng)相為乙腈:0.1﹪三氟乙酸水溶液=45:55

2、,流速為1.0mL/min,進(jìn)樣量為20μl;柱溫為室溫.該方法具有良好的線性關(guān)系,線性范圍為0～1.183mg/ml(MPA)和0～0.862mg/ml(MMF),準(zhǔn)確度和精密度均較高. 采用自然選育的方法將實(shí)驗(yàn)室保藏的菌種進(jìn)行復(fù)壯純化處理,得到一株生產(chǎn)水平穩(wěn)定的菌種P.brevicompactum L.該菌種的產(chǎn)抗能力較原始出發(fā)菌株提高了9﹪.對(duì)該棣MPA產(chǎn)生菌的搖瓶發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究,優(yōu)化了培養(yǎng)基組成和培養(yǎng)條件,考察了斜面

3、培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、碳源、氮源、Fe<'2+>以及pH、溫度、搖床轉(zhuǎn)速等對(duì)MPA發(fā)酵的影響.調(diào)整后的培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)基初始pH 4.0,28℃,振蕩培養(yǎng)(220r/min)13天.采用均勻設(shè)計(jì)得到優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基配方是:葡萄糖240g/L,甘氨酸22 g/L,KH<,2>PO<,4, 6 g/L;在該優(yōu)化條件下進(jìn)行液體發(fā)酵,MPA的搖瓶發(fā)酵產(chǎn)量達(dá)到8.565g/L,比在原始條件下提高了89﹪. 建立了從菌體里提取MPA的工藝過(guò)程

4、.加入7﹪-10﹪的硅藻土攪拌30min,用2倍體積的乙醇浸泡過(guò)濾得到的菌體,將浸泡液濃縮至無(wú)乙醇,得到MPA固體,將其完全溶于2倍體積的乙酸乙酯,加入5﹪活性炭脫色,濾除活性炭,脫色液濃縮-4℃放置24h,析出大量淺棕色MPA針狀晶體.在40℃把粗品完全溶于5倍體積的乙醇中,-4℃放置24h,過(guò)濾、干燥,得到了含量達(dá)到99﹪的MPA純品,整個(gè)流程收率為45﹪. 建立了合成MMF的直接酯化法的工藝過(guò)程.將過(guò)量嗎啉乙醇加入到含有M