新型免疫抑制劑FTY720干預(yù)肺纖維化的體內(nèi)及體外研究.pdf

1、目的：利用博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠動物模型和體外培養(yǎng)的人肺成纖維細胞評價新型免疫抑制劑FTY720 對肺纖維化的影響，探討了FTY720 對肺間質(zhì)炎癥、組織損傷和纖維化的影響和可能的作用機制。
　　 方法：
　　 1. 應(yīng)用單次氣管內(nèi)注入博萊霉素(3.5mg／kg體重)的方法建立C57小鼠肺纖維化模型，并通過灌胃給藥FTY720 (0.1mg/kg/d)來實現(xiàn)對小鼠肺纖維化的干預(yù)，分別于第7，14，21天處死小鼠；

2、r>　　 2. 對小鼠肺組織進行HE 染色及Masson 染色, 觀察各組肺組織病理變化并評估炎癥和肺纖維化程度; 免疫組化法動態(tài)觀察肺組織中TGF-β,α-SMA 的表達；通過Real-time PCR法測定肺組織中細胞因子VEGF, IL-1β, α-SMA , Col1a1mRNA的表達水平，評價FTY720在體內(nèi)的抗纖維化效應(yīng)；
　　 3. 體外用脂多糖刺激人肺成纖維細胞（HFL1），利用Xcelligence實時監(jiān)測

3、系統(tǒng)觀察FTY720對HFL1細胞增殖的影響；Real-time PCR法檢測細胞中TGF-β, IL-6, IL-8, MMP2, TIMP1, VEGF, α-SMA mRNA的表達水平，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定細胞上清中纖維連結(jié)蛋白（FN）的分泌水平，評價FTY720在體外的抗纖維化效應(yīng)；
　　 4. 利用Transwell趨化實驗檢測FTY720對溶血磷脂酸（LPA）介導(dǎo)的人肺成纖維細胞趨化的影響。
　　

4、 結(jié)果：
　　 1. 建立了穩(wěn)定的博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化C57 小鼠模型，HE 染色及Masson 染色顯示FTY720 干預(yù)后小鼠肺纖維化程度較模型組減輕；免疫組化結(jié)果肺組織TGF-β、α-SMA 陽性表達顆粒較模型組減少；FTY720 干預(yù)后VEGF, IL-1β，α-SMA ,Col1a1 在mRNA 水平上表達較模型組下調(diào)，且均具統(tǒng)計學(xué)意義；
　　 2. 體外研究發(fā)現(xiàn)FTY720 干預(yù)后HFL1 的增殖和趨化活性下

5、降，細胞上清中分泌的FN 蛋白水平降低，TGF-β mRNA 表達水平下調(diào), 且具有濃度依賴性，IL-6, IL-8, MMP2, α-SMA mRNA 水平也下調(diào)，具有統(tǒng)計學(xué)意義。但在TIMP1, VEGF mRNA 水平上未檢測出差異。
　　 結(jié)論：
　　 1. FTY720對博萊霉素誘導(dǎo)小鼠肺纖維化具有保護作用，可明顯降低肺泡炎、肺泡破壞程度及纖維化程度；
　　 2. FTY720的保護作用主要是通過抑制T