CXCL12-CXCR4拮抗劑AMD3100在缺血性腦卒中的作用.pdf

1、第一部分AMD3100通過(guò)拮抗CXCL12/CXCR4通路抑制M1型小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的遷移并改善卒中預(yù)后
　　[目的]缺血性腦卒中后，CXCL12/CXCR4信號(hào)通路在炎癥細(xì)胞趨化至損傷區(qū)域過(guò)程中起著關(guān)鍵性的作用。小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞作為卒中后重要的炎癥細(xì)胞，被激活后的不同極化表型對(duì)炎癥反應(yīng)的影響受到了廣泛的關(guān)注。我們?cè)诖嘶A(chǔ)上探討，調(diào)控CXCL12/CXCR4軸是否可通過(guò)影響不同極性的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞，從而抑制卒中后的炎

2、癥反應(yīng)。
　　[方法]采用成年雄性（Sprague-Dawley，SD）大鼠建立永久性大腦中動(dòng)脈閉塞（permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO）模型。pMCAO后1小時(shí)及隨后的每12小時(shí)注射AMD3100，共5次。然后，在pMCAO后不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)梗死體積進(jìn)行了評(píng)估。免疫熒光染色觀察pMCAO后AMD3100對(duì)腦組織中不同極性的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的影響。糖氧剝奪（Oxygen

3、-glucose deprivation，OGD）模型用來(lái)模擬體外缺血條件，應(yīng)用Transwell實(shí)驗(yàn)來(lái)研究調(diào)控CXCL12/CXCR4信號(hào)通路對(duì)不同的極性小膠質(zhì)細(xì)胞遷移的影響。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)缺血周邊區(qū)（IBZ）分泌的相關(guān)細(xì)胞因子mRNA的表達(dá)。應(yīng)用MTT比色法和定量MAP-2酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，檢測(cè)不同極性小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)細(xì)胞活性的影響。
　　[結(jié)果]體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，急性期給予AMD3100治療減少了pMCAO后的梗死體積。

4、顯著降低了活化的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞數(shù)量的增加，而并未影響其活化狀態(tài)。缺血損傷激活了幾乎所有受影響區(qū)域的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞，并誘導(dǎo)其M1和M2兩種不同的極化表型的增加。缺血邊界區(qū)（ischemic borderzone，IBZ）大多數(shù)活化的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞為 M1型，經(jīng)急性期給予 AMD3100治療后顯著減少了遷移至 IBZ的M1型的數(shù)量。同時(shí)，降低了腦組織缺血周邊區(qū)域促炎細(xì)胞因子，包括腫瘤壞死因子（Tumor necrosis

5、factorα，TNF-α）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible Nitric Oxide Synthase，iNOS）等的基因表達(dá)水平。此外，缺血損傷后，幾乎所有的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞均有表面受體CXCR4的表達(dá)。在體外實(shí)驗(yàn)中，OGD條件下AMD3100通過(guò)拮抗CXCL12/CXCR4通路對(duì)M1和M2型小膠質(zhì)細(xì)胞的遷移，產(chǎn)生了不同程度的抑制作用。M1型小膠質(zhì)細(xì)胞可能通過(guò)分泌相關(guān)細(xì)胞因子而抑制神經(jīng)元的存活。
　　[結(jié)論]缺血性

6、腦卒中急性期給予AMD3100，通過(guò)拮抗CXCL12/CXCR4信號(hào)通路，主要抑制了M1型的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞遷移至缺血周邊區(qū)域，從而減輕炎癥反應(yīng)并改善神經(jīng)功能恢復(fù)。調(diào)控招募至缺血周邊區(qū)域的M1和M2型小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞之間的平衡，有可能為缺血性腦卒中提供一種潛在的治療策略。
　　第二部分AMD3100通過(guò)拮抗CXCL12/CXCR4通路對(duì)卒中后血管新生的影響
　　[目的]為研究長(zhǎng)期給予CXCR4受體拮抗劑AMD3100

7、的治療，是否會(huì)進(jìn)一步改善腦卒中的預(yù)后。
　　[方法]采用雄性SD(Sprague Dawley，SD)大鼠永久性大腦中動(dòng)脈閉塞（permanent middle cerebral artery occlusion，pMCAO）建立腦卒中動(dòng)物模型。用特定的抗體標(biāo)記
　　EPCs。連續(xù)7天給予AMD3100處理，觀察對(duì)內(nèi)源性?xún)?nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）募集的影響。FITC-葡聚

8、糖染色用于毛細(xì)血管密度測(cè)定，神經(jīng)行為學(xué)功能通過(guò)神經(jīng)功能缺損評(píng)分進(jìn)行評(píng)估。
　　[結(jié)果] pMCAO后，經(jīng)連續(xù)7天給予AMD3100處理后，缺血邊界區(qū)（Ischemic boundaryzone，IBZ）的內(nèi)源性EPCs數(shù)量以及毛細(xì)血管密度顯著減少，而且神經(jīng)行為學(xué)功能的恢復(fù)，較生理鹽水組更差。
　　[結(jié)論]我們的研究表明，pMCAO后內(nèi)源性的EPCs經(jīng)由CXCL12/ CXCR4軸招募至IBZ。而且，經(jīng)長(zhǎng)期給予AMD3100處