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文檔簡介
1、 目的：制備和鑒定抗8-異前列腺素(8-iso-prostaglandin F 2alpha,8-iso-PGF2α)單克隆抗體；制備8-iso-PGF2α測定試劑盒(ELISA)；應(yīng)用該試劑盒測定缺氧缺血性腦病(hypoxic-ischemic encephalopathy,HIE)新生兒尿8-iso-PGF2α水平。
方法：利用碳二亞胺法(EDC)連接半抗原8-iso-PGF2α和載體蛋白BSA/OVA,免疫BALB/C
2、小鼠,將免疫成功的小鼠脾細(xì)胞與SP2/O融合后利用間接ELISA篩選出陽性克隆并擴(kuò)大培養(yǎng),陽性克隆制備腹水后進(jìn)行提純。應(yīng)用辣根過氧化物酶標(biāo)記8-iso-PGF2α,制備ELISA法測定試劑盒,并測定126例正常新生兒和151例HIE患兒尿8-iso-PGF2α含量。
結(jié)果：獲得一株穩(wěn)持續(xù)定分泌抗8-iso-PGF2α單克隆抗體的細(xì)胞株。ELISA試劑盒中的8-iso-PGF2α抗體包被濃度為1μg/ml,溫育時(shí)間為30分鐘,C
3、utoff值為0.14+NC,所需樣本量為100μl,試劑盒37℃放置7天OD450值無明顯變化。正常新生兒尿8-iso-PGF2α水平為27.4±9.8ng/mmol·Cr,而輕、中和重度HIE患兒分別為65.3±13.2、154.6±31.6和241.7±41.0 ng/mmol·Cr,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<；0.01)；以尿8-iso-PGF2α47.0、91.7和217.5ng/mmol·Cr作為區(qū)分正常與輕度、輕度與中度、
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