RUNX2基因調(diào)控人牙囊細(xì)胞生物學(xué)特性的可能機制——microRNA相關(guān)調(diào)控網(wǎng)絡(luò).pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級碩士學(xué)位論文RUNX2基因調(diào)控人牙囊細(xì)胞生物學(xué)特性的可能機制一microRNA相關(guān)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)PossibleMechanismofCrosstalkbetweenmicroRNAandRUNX2geneinHumanDentalFollicleCells課題來源：國家自然科學(xué)基金面上項目(項目編號：81271160)；廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金“顱骨鎖骨發(fā)育不良綜合征患者牙齒發(fā)育及萌出異常的分子調(diào)控機制研究”(項目編

2、號：A2012106)學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院陳沛章錦才口腔臨床醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)型碩士研究生第一臨床醫(yī)學(xué)院2013年5月20日廣州中文摘要腔?？茩z查，對其進(jìn)行全身健康狀況檢查。結(jié)果顯示該患者具有比較典型的CCD特殊面容，眼距增寬，鼻梁塌陷，額部圓突，頜面部小，面中部發(fā)育不足，側(cè)貌為凹面形?？谇粌?nèi)表現(xiàn)為乳牙滯留，多數(shù)恒牙及多生牙埋伏于頜骨中，伴有鎖骨發(fā)育不全，囟門閉合遲緩，第一指骨末端關(guān)節(jié)間隙變窄等等。臨床特征符合顱骨鎖

3、骨發(fā)育不全(CCD)的診斷。患者的姐姐及雙親無異常，作為對照組進(jìn)行研究。收集患者靜脈血，提取全血基因組DNA，根據(jù)本課題組前期研究結(jié)果利用7對引物PCR擴增RUNX2基因7個外顯子，雙向直接測序，BLAST同源序列分析，檢測基因突變位點。體外分離培養(yǎng)患者來源的牙囊細(xì)胞及正常對照牙囊細(xì)胞，進(jìn)行Trizol法RNA提取，反轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，對cDNA測序驗證基因突變。采用實時定量PCR(qRTPCR)檢測RUNX2mRNA表達(dá)水平的改變。結(jié)

4、果：全血基因組測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)，患者RUNX2基因第2外顯子插入TG突變，導(dǎo)致下游多位點規(guī)則套峰，而正常對照組測序中未見這種改變。該突變導(dǎo)致第104位的谷氨酸GAG(W)移碼突變?yōu)樯彼酺GG(W)，并在第144位提前產(chǎn)生TAG終止密碼子，使RUNX2蛋白翻譯中止，引起C端部分氨基酸丟失。牙囊細(xì)胞cDNA測序結(jié)果相同。該突變型為c309310insTG。實時定量PCR結(jié)果顯示，基因突變后RUNX2mRNA表達(dá)下調(diào)，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P005)

5、。結(jié)論：本研究在CCD患者全血基因組DNA及牙囊細(xì)胞cDNA中均檢測到RUNX2基因的相同突變位點，而家系中健康成員未發(fā)現(xiàn)此突變，進(jìn)一步驗證了RUNX2基因是CCD患者的致病基因。經(jīng)搜索SNP數(shù)據(jù)庫，未發(fā)現(xiàn)此突變位點的報告，證明本研究所檢測到的為RUNX2基因新的突變位點，補充了國內(nèi)外CCD致病基因的突變位點數(shù)據(jù)庫。二、牙囊細(xì)胞中差異表達(dá)miRNA的篩選及靶基因預(yù)測目的：篩選RUNX2突變牙囊細(xì)胞和正常人牙囊細(xì)胞差異表達(dá)的miRNA并預(yù)