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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
1.在糖尿病大鼠視網(wǎng)膜中,研究結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growthfactor, CTGF)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)基因表達(dá)隨時(shí)間變化,及透射電鏡下觀測(cè)大鼠視網(wǎng)膜微血管超微結(jié)構(gòu)的變化。
2.探討經(jīng)玻璃體腔注射抗VEGF新藥lucentis和CTGF shRNA后,CTGF和VEGFmRNA表達(dá)水
2、平及視網(wǎng)膜微血管超微結(jié)構(gòu)的改變。
方法:
1.將48只大鼠隨機(jī)分為糖尿病組(DM組)和正常對(duì)照組(CON組),在造模成功后8、10、12周取大鼠視網(wǎng)膜標(biāo)本行逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)VEGF和CTGF的基因表達(dá)變化。同時(shí)在各時(shí)點(diǎn)取各組大鼠眼杯,經(jīng)戊二醛固定,透射電子顯微鏡觀察。
2.根據(jù)實(shí)驗(yàn)1結(jié)果,在造模后10周,將DM大鼠隨機(jī)分為lucentis單靶點(diǎn)干預(yù)組,CTGF shRNA單靶點(diǎn)干預(yù)組,l
3、ucentis和CTGF shRNA雙靶點(diǎn)干預(yù)組,未干預(yù)組,以及正常對(duì)照組。干預(yù)1周后取各組大鼠的視網(wǎng)膜標(biāo)本,行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)VEGF和CTGF的基因表達(dá)及透射電鏡觀察。
結(jié)果:
1.實(shí)驗(yàn)1:在第8周時(shí)DM組大鼠視網(wǎng)膜CTGF mRNA水平較正常組顯著增高(P=0.037)且一直持續(xù)到第12周(P=0.032,P=0.039),而VEGF的mRNA水平在第10周較正常對(duì)照組開(kāi)始升高,持續(xù)到12周,差異均有
4、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.043,P=0.036)。
2.實(shí)驗(yàn)1:CON組未見(jiàn)異常,DM組從第8周開(kāi)始出現(xiàn)異常改變,表現(xiàn)為視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,向管腔突出,細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)凝集居邊,細(xì)胞質(zhì)內(nèi)線粒體明顯腫脹,粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈池樣擴(kuò)張,毛細(xì)血管基底膜增厚。且隨著病程延長(zhǎng),改變更加明顯,可見(jiàn)到閉鎖的毛細(xì)血管,以DM12組最為顯著。
3.實(shí)驗(yàn)2:Lucentis單靶點(diǎn)干預(yù)組,VEGF基因表達(dá)較DM未干預(yù)組顯著降低(P=0.0
5、14),而CTGF表達(dá)較DM未干預(yù)組則顯著升高(P=0.048); CTGFshRNA單靶點(diǎn)干預(yù)組,CTGF mRNA水平降至與正常對(duì)照組相似(P=0.825),而且VEGF mRNA表達(dá)也降低(P=0.026);雙靶點(diǎn)干預(yù)組,VEGF和CTGFmRNA較未干預(yù)組均明顯下調(diào)(P<0.001,P=0.001),與正常對(duì)照組無(wú)顯著區(qū)別(P=0.292,P=0.287)。
4.實(shí)驗(yàn)2:CON組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管管腔平滑完整,內(nèi)皮細(xì)胞
6、扁平緊貼于連續(xù)的基膜上。DM未干預(yù)組視網(wǎng)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞水腫,異染色質(zhì)邊集。毛細(xì)血管管腔狹窄。雙靶點(diǎn)干預(yù)組毛細(xì)血管腔較完整,內(nèi)皮細(xì)胞稍水腫,周細(xì)胞清晰完整,超微結(jié)構(gòu)接近于正常對(duì)照組。Lucentis和CTGF shRNA單靶點(diǎn)干預(yù)組仍可見(jiàn)視網(wǎng)膜毛細(xì)血管管腔狹窄,內(nèi)皮細(xì)胞水腫,異染色質(zhì)邊集,超微結(jié)構(gòu)完整性明顯低于雙靶點(diǎn)干預(yù)組。
結(jié)論:
在早期DM大鼠視網(wǎng)膜內(nèi),VEGF和CTGF的基因表達(dá)即開(kāi)始升高,且CTGF
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