VEGF-A對(duì)大鼠視網(wǎng)膜表達(dá)TGF-β1及CTGF的影響的研究.pdf

1、目的： 觀察玻璃體腔注射血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-A(vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A)后不同時(shí)間大鼠視網(wǎng)膜表達(dá)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor，TGF-β1)和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connective tissue growth factor，CTGF)的變化情況，探討二者在視網(wǎng)膜新生血管性疾病發(fā)病機(jī)制中的作用，為視網(wǎng)膜新生血管性疾病的臨床防治

2、提供基礎(chǔ)理論依據(jù)。 方法： 1.Wistar大鼠共33只，鼠齡12-14周，體重約250g，雌雄不限，均經(jīng)裂隙燈、檢眼鏡檢查排除眼部疾病。隨機(jī)選擇24只作為處理組，剩余9只作為空白對(duì)照組(C組)，并隨機(jī)分為3個(gè)亞組。處理組右眼玻璃體腔注射含有100ngVEGF-A的0.1％BSA的PBS溶液3μl(A組)，左眼玻璃體腔注射0.1％BSA的PBS溶液3μl(B組)，C組不給任何處理，注射時(shí)發(fā)生玻璃體出血的眼不納入本研究。處

3、理組分別在注射后24、48、72小時(shí)(即A1-A3組、B1-B3組)，選取相應(yīng)空白對(duì)照組亞組(即Cl-C3組)行10％水合氯醛腹腔注射麻醉。 2.摘除眼球，平行于視神經(jīng)連續(xù)冰凍切片，HE染色，光鏡下觀察視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)變化，免疫組化SABC法觀察視網(wǎng)膜各層陽性染色情況。每只眼球選取2張結(jié)構(gòu)完整的視網(wǎng)膜切片，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野(×200倍)，Image-ProPlus6.0圖像處理分析軟件分析各組染色陽性區(qū)的平均累積光密度(in

4、tegratedopticdensity，IOD)。 3.運(yùn)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)不同處理組和空白對(duì)照組及不同時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù)采用采用單因素方差分析，并用SNK檢驗(yàn)及PostHoc的Tamhane'sT2進(jìn)行組間比較，雙側(cè)檢驗(yàn)，P<0.05差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.HE染色 A1組、B組和C組視網(wǎng)膜層次結(jié)構(gòu)整齊分明，光感受器細(xì)胞內(nèi)外節(jié)形態(tài)規(guī)整，內(nèi)、外核層細(xì)胞核染色深紫，染色均勻，RPE細(xì)胞核呈淡

5、紫色，扁橢圓形，邊界清晰，染色均勻。隨著時(shí)間的推移，視網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)和變化不明顯。A2組視網(wǎng)膜厚度增加，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞腫脹，光感受器細(xì)胞內(nèi)外節(jié)形態(tài)欠規(guī)整，結(jié)構(gòu)欠清，RPE細(xì)胞腫脹變圓，但數(shù)量變化不明顯。A3較A2組變化不明顯。 2.免疫組織化學(xué)染色 C組CTGF免疫組化染色陽性部位主要在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(GCL)和內(nèi)叢狀層(IPL)，為弱陽性。B組呈現(xiàn)輕度的全視網(wǎng)膜染色的增加，A組在GCL層表現(xiàn)為更強(qiáng)的CTGF染色。TGF-β1染色僅

6、在視網(wǎng)膜血管結(jié)構(gòu)觀察到。TGF-β1染色在B組略有增強(qiáng)，A組與C組比較明顯增強(qiáng)。A組各亞組間CTGF表達(dá)陽性區(qū)的平均IOD差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=41.361，P=0.000)，進(jìn)一步用SNK法進(jìn)行組間比較，各亞組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；B組不同時(shí)間CTGF表達(dá)陽性區(qū)的平均IOD差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=25.284，P=0.000)，進(jìn)一步行SNK法檢驗(yàn)，B1與B2、B2與B3組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。C組不

7、同時(shí)間CTGF表達(dá)陽性區(qū)平均IOD差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.002，P=0.998)。A組各亞組間TGF-β1表達(dá)陽性區(qū)的平均IOD差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=26.783，P=0.000)，進(jìn)一步用SNK法進(jìn)行組間比較，各亞組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。B組不同時(shí)間TGF-β1表達(dá)陽性區(qū)的平均IOD差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=27.644，P=0.000)，進(jìn)一步行PostHoc的Tamhane'sT2法進(jìn)行組間比較，B1與B2、B2

8、與B3組間差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).C組不同時(shí)間TGF-β1表達(dá)陽性區(qū)平均IOD差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=1.308，P=0.300)。不同處理后24小時(shí)，A1、B1、C1組CTGF及TGF-β1陽性區(qū)平均IOD差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F1=3.482，P1=0.053；F2=0.604，P2=0.558)，尚可認(rèn)為玻璃體腔注射VEGF-A后24小時(shí)尚未引起明顯CTGF及TGF-β1表達(dá)增高。注射后48小時(shí)，2種因子的表達(dá)達(dá)高峰，72

9、小時(shí)時(shí)較48小時(shí)下降。A2、B2、C2及A3、B3、C3組CTGF及TGF-β1陽性區(qū)平均IOD差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，SNK法各組間比較，CTGF及TGF-β1各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論： 本實(shí)驗(yàn)采用玻璃體腔注射的方法，研究外源性VEGF-A對(duì)大鼠視網(wǎng)膜表達(dá)CTGF和TGF-β1的影響，并通過免疫組織化學(xué)染色方法觀察TGF-β1及CTGF表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)外源性VEGF-A能誘導(dǎo)TGF-β1及