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文檔簡介
1、糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabeticretinopathy,DR)是糖尿病(diabetesmellitusDM)最為常見和嚴重的微血管并發(fā)癥之一,也是成人盲的主要致盲性眼病之一。DR病理改變主要有毛細血管周細胞選擇性凋亡、微血管基底膜增厚、內皮細胞增生、微動脈瘤形成、以及新生血管形成等一系列改變。目前具體的發(fā)生機理尚未完全明確,主要的因素包括高血糖狀態(tài)、糖基化終末產物(AGEs)的堆積、多元醇-肌醇通路代謝異常、活性氧(ROS)損傷、甘
2、油二脂-蛋白激酶C(PKC)系統(tǒng)的活化、血管內皮生長因子(VEGF)的作用、血流緩慢粘稠、無灌注區(qū)形成等。由于視網(wǎng)膜激光光凝和玻璃體手術只能挽救一部分的視網(wǎng)膜功能,如何利用藥物防治DR的發(fā)生發(fā)展就顯得非常重要。AGEs抑制劑、PKC抑制劑、VEGF抑制劑、改善微循環(huán)藥物都是目前研究的熱點,但大部分臨床研究效果不明顯。中醫(yī)中藥在視網(wǎng)膜血管性疾病的治療上有著豐富的臨床積累,對DR的防治有一定的效果。 復方血栓通膠囊是由三七、丹參、玄
3、參、黃芪組成的純中藥制劑,有改善微循環(huán)、清除自由基、調節(jié)凝血狀態(tài)、改善血液流變學狀態(tài)等效果。臨床觀察認為該藥能有效地防治糖尿病性視網(wǎng)膜病變,在增殖期糖尿病性視網(wǎng)膜病變手術治療后也有輔助功能,但相關的實驗研究尚未見諸報道。 本研究就復方血栓通對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的防治效果進行研究,具體如下: 目的:探討復方血栓通對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的干預效果,并研究其劑量一療效的關系。 方法:STZ(鏈脲佐菌素)誘導糖尿病大鼠
4、成功后,取55只糖尿病大鼠隨機分成5組,并取9只正常雄性Wistar大鼠設為正常對照組: N組:正常大鼠組;DM組:糖尿病大鼠非治療組;FXST-H組:糖尿病大鼠,接受復方血栓通高劑量1800mg/(kg·day)治療;FXST-M組:糖尿病大鼠,接受復方血栓通中劑量900mg/(kg·day)治療;FXST-L組:糖尿病大鼠,接受復方血栓通低劑量450mg/(kg·day)治療;DB組:糖尿病大鼠,接受羥苯磺酸鈣300mg/(
5、kg·day)治療。正常大鼠組n=9;其余各組動物數(shù)均為n=11。 實驗進行到第20周的時候,進行如下處理:(1)視網(wǎng)膜消化鋪片研究:每組取8只動物,麻醉后取其右眼球進行視網(wǎng)膜消化鋪片,顯微鏡下觀察微血管數(shù)目,計算周細胞/內皮細胞比值,測量毛細血管相對面積。 (2)石蠟切片HE染色及免疫組化檢查VEGF表達:上述每組8只大鼠的左眼固定后常規(guī)石蠟切片,行HE染色觀察常規(guī)病理改變,并做SABC法免疫組化檢測VEGF表達情況,
6、高倍鏡下觀察陽性表達情況并計數(shù)。 (3)透射電鏡研究:每組取1只大鼠,麻醉后取其右眼視網(wǎng)膜行透射電鏡檢查,觀察視網(wǎng)膜各層變化,比較各組視網(wǎng)膜超微結構改變。 (4)所有結果于SPSS統(tǒng)計軟件下進行統(tǒng)計學分析。 結果:(1)消化鋪片結果:N組:微血管疏松,毛細血管管徑均勻一致,行走規(guī)則,可見極少數(shù)無細胞毛細血管,未見周細胞鬼影。微血管密度(19.0±3.3)/HPD(HPD,高倍視野直徑),血管相對面積34.38±4
7、.14%,P/E比值(周細胞/內皮細胞比值)0.3750±0.02915。 DM組:與N組比較,視網(wǎng)膜微血管網(wǎng)明顯變密,血管迂曲,走行紊亂;管徑大小不一,出現(xiàn)節(jié)段性膨大,部分管腔狹窄;可見較多無細胞毛細血管、周細胞鬼影等。微血管密度為(24.4±2.4)/HPD,血管相對面積43.76±2.27%,與N組比較明顯增加;P/E比值為0.2802±0.02001,與N組比較有所下降。以上三個指標與N組對應指標相比差別具有統(tǒng)計學意義(
8、P<0.05)。 FXST-H組:視網(wǎng)膜微血管網(wǎng)輕度密集,血管走行基本規(guī)則,管徑相對一致,可見部分節(jié)段性膨大,無細胞毛細血管、周細胞鬼影等較DM組減少。與DM組相比,微血管密度(19.5±1.4)/HPD、血管相對面積34.88±3.14%有所下降,P/E比值0.3307±0.02949有所上升。三個指標與DM組對應指標相比差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 FXST-M組:病變程度較DM組輕。與DM組相比,微血管密度
9、(20.7±2.8)/HPD、血管相對面積38.98±1.96%有所下降,P/E比值0.3414±0.01686有所上升。三個指標與DM組對應指標相比差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 FXST-L組:病變程度較DM組輕。與DM組相比,微血管密度(20.6±3.2)/HPD、血管相對面積39.81±3.58%有所下降,P/E為0.3283±0.01262有所上升。三個指標與DM組對應指標相比差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
10、 DB組:視網(wǎng)膜微血管改變較DM組明顯減輕。微血管網(wǎng)相對疏松,血管走行相對規(guī)則,管徑基本一致,可見部分節(jié)段性膨大,無細胞毛細血管、周細胞鬼影等較DM組減少。與DM組相比,微血管密度(20.3±2.6)/HPD、血管相對面積38.13±2.88%有所下降,P/E比值為0.3248±0.01942有所上升。三個指標與DM組對應指標相比差別具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 (2)石蠟切片常規(guī)染色及免疫組化結果:N組:HE染色示
11、視網(wǎng)膜各層次清晰,細胞排列緊密,未見明顯異常。免疫組化示視網(wǎng)膜上少量VEGF陽性表達(5.5±1.0/HP)(HP,每高倍視野)。 DM組:HE染色示視網(wǎng)膜光感受器細胞層結構破壞明顯,余各層結構細胞水腫、間隙增寬,部分細胞出現(xiàn)異染色。免疫組化示視網(wǎng)膜VEGF陽性表達數(shù)目顯著增多(15.0±1.8/HP,P<0.001)。 FXST-H組:HE染色示視網(wǎng)膜各層病變較DM組明顯減輕;免疫組化示視網(wǎng)膜VEGF陽性表達數(shù)目較DM
12、組降低(7.7±3.9/HP,P<0.001)。 FXST-M組:HE染色示視網(wǎng)膜各層病變較DM組明顯減輕;免疫組化示視網(wǎng)膜VEGF陽性表達數(shù)目較DM組降低(7.7±2.0/HP,P<0.001)。 FXST-L組:HE染色示視網(wǎng)膜各層病變較DM組明顯減輕;免疫組化示視網(wǎng)膜VEGF陽性表達數(shù)目較DM組降低(7.2±1.0/HP,P<0.001)。 DB組:HE染色示視網(wǎng)膜各層病變較DM組明顯減輕;免疫組化示視網(wǎng)膜
13、VEGF陽性表達數(shù)目較DM組降低(6.3±0.9/HP,P<0.001)。 (3)透射電鏡結果:N組:視網(wǎng)膜各層次細胞超微結構良好,外節(jié)膜盤排列整齊,外核層細胞間隙無增寬,細胞器無腫脹,毛細血管管腔無閉塞,基底膜無增厚,電子密度均勻。 DM組:視網(wǎng)膜超微結構出現(xiàn)明顯的改變:視桿細胞外節(jié)膜盤紊亂,部分出現(xiàn)溶解、斷裂;內節(jié)線粒體腫脹,出現(xiàn)空泡變,外核層細胞水腫,間隙增寬,線粒體腫脹;部分毛細血管基底膜增厚,部分管腔閉塞。
14、 FXST-H、FXST-M、FXST-L組:該三組動物超微結構變化程度均較DM組顯著減輕,視桿細胞排列較DM組整齊,內節(jié)線粒體腫脹不明顯,外核層細胞形態(tài)良好,間隙正常。毛細血管管腔無閉塞,基底膜增厚不明顯。 DB組:視桿細胞外節(jié)膜盤、外核層、毛細血管管腔、基底膜等改變均較DM組明顯減輕,與FXST三個治療組基本相似。 結論:1.20周糖尿病大鼠,其視網(wǎng)膜各層結構存在明顯的水腫、細胞結構破壞現(xiàn)象;并有視網(wǎng)膜毛細血管迂
15、曲,密度增高,管腔大小不一,周細胞/內皮細胞比值下降;同時可見VEGF過表達現(xiàn)象。 2.本研究中,復方血栓通能有效地改善糖尿病大鼠視網(wǎng)膜微血管改變,減輕視網(wǎng)膜各層結構水腫、壞死情況,改善超微結構改變,抑制VEGF過表達。 3.本研究中,復方血栓通三個劑量組效果大致相當,差異沒有統(tǒng)計學意義。 4.復方血栓通對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的干預效果與羥苯磺酸鈣相似。 5.有效地抑制VEGF過表達,可能是復方血栓通改善
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