二氫青蒿素對(duì)抑制人尿道瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　尿道損傷及尿道手術(shù)后尿道狹窄發(fā)生率較高。至今，臨床上尚無(wú)切實(shí)有效的方法治療尿道狹窄，始終不能擺脫狹窄-擴(kuò)張/手術(shù)-再狹窄的診治怪圈，給患者帶來(lái)極大的痛苦。尿道瘢痕組織是尿道創(chuàng)傷修復(fù)過(guò)程的產(chǎn)物，沒(méi)有瘢痕就不會(huì)有創(chuàng)面的愈合。但是瘢痕一旦過(guò)度生長(zhǎng)，就會(huì)產(chǎn)生尿道狹窄。目前研究發(fā)現(xiàn)：狹窄的尿道組織存在典型的瘢痕過(guò)度增生改變。但對(duì)引起尿道瘢痕過(guò)度增生的影響因素不是很明確，因而缺乏有效的措施阻止尿道狹窄的發(fā)生。在對(duì)皮膚創(chuàng)面瘢痕形成的

2、研究中發(fā)現(xiàn)：創(chuàng)面愈合過(guò)程中成纖維細(xì)胞表現(xiàn)出強(qiáng)烈的增殖能力以及膠原大量分泌、沉積，所以認(rèn)為成纖維細(xì)胞過(guò)度表達(dá)及膠原的異常分泌是瘢痕產(chǎn)生的根本原因。成纖維細(xì)胞是最主要的修復(fù)細(xì)胞。青蒿素是我國(guó)有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的藥物，我國(guó)正對(duì)該藥進(jìn)行大力開(kāi)發(fā)和研究。近年發(fā)現(xiàn)青蒿素有較好的抑制瘢痕成纖維細(xì)胞增殖作用。本課題旨在通過(guò)對(duì)二氫青蒿素干預(yù)后抑制人尿道瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的研究，以揭示二氫青蒿素抑制人尿道瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的機(jī)制，為人尿道瘢痕防治開(kāi)辟新路，為臨

3、床預(yù)防和治療尿道瘢痕狹窄提供理論依據(jù)。
　　方法：
　　1.采用組織塊貼壁法進(jìn)行尿道瘢痕成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)，使用含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基，37℃，5％CO2，飽和濕度下培養(yǎng)；描述其生長(zhǎng)曲線、分裂指數(shù)、形態(tài)及波形蛋白表達(dá)。
　　2.采用MTT法測(cè)定二氫青蒿素對(duì)尿道瘢痕成纖維細(xì)胞的IC50,采用TUNEL法檢測(cè)二氫青蒿素作用后尿道瘢痕成纖維細(xì)胞凋亡情況，同時(shí)采用比色法測(cè)定caspase-3、8和9在二氫

4、青蒿素作用后的活化情況，以判斷二氫青蒿素作用后是否導(dǎo)致尿道瘢痕成纖維細(xì)胞中的caspase活化，并了解是通過(guò)哪條通路促進(jìn)凋亡。
　　結(jié)果：
　　1.尿道瘢痕成纖維細(xì)胞培養(yǎng)成功率75％（6/8）；50～66天可傳第一代，以后每5～10天可傳一代，傳代后生長(zhǎng)良好；細(xì)胞為長(zhǎng)梭形，波形蛋白表達(dá)陽(yáng)性。
　　2.二氫青蒿素對(duì)尿道瘢痕成纖維細(xì)胞的IC50為145μmol/L。通過(guò)TUNEL法檢測(cè)到145μmol/L二氫青蒿素作用于尿