色氨酰tRNA合成酶表達對BALB-c小鼠淋巴瘤動物模型細胞增殖的影響.pdf

1、目的：淋巴瘤是起源于淋巴結和結外淋巴組織的免疫系統(tǒng)惡性腫瘤，其中，非霍奇金淋巴瘤(NHL)的發(fā)病率和死亡率逐年上升。近年來，細胞免疫功能失衡或免疫耐受作為惡性腫瘤的發(fā)病機制之一逐漸成為共識。最新的研究顯示，色氨酸是唯一與細胞免疫功能紊亂相關的氨基酸，其中，吲哚胺2，3雙加氧酶(IDO)通過催化色氨酸沿犬鳥氨酸途徑降解，減低細胞微環(huán)境中的色氨酸水平而發(fā)揮對細胞增殖的抑制作用[1-5]。另一種色氨酸代謝酶--色氨酰tRNA合成酶(TTS)增

2、加細胞內色氨酰-tRNA儲備，對抗IDO介導的色氨酸消耗，維持細胞的活化增殖狀態(tài)。之前的研究已證實，在非霍奇金淋巴瘤的腫瘤細胞中存在IDO的表達，并與預后密切相關。本實驗主要通過BALB/e小鼠皮下注射A20細胞建立淋巴瘤動物模型，IDO抑制劑1-MT瘤旁、瘤內注射，免疫組化及western blot檢測組織水平TTS的表達情況，及IDO抑制劑對TTS表達水平的影響，進一步探討色氨酸代謝紊亂與淋巴瘤細胞增殖的關系，為臨床免疫干預治療提供

3、新的思路。
　　 方法1.建立淋巴瘤動物模型：4-8周BALB/c小鼠飼養(yǎng)與無病原條件下。隨機分為三組后，將生長狀態(tài)良好的A20細胞注射于小鼠的右腋背部皮下，約5×106/只，每周三次觀察腫瘤生長，并與注射后20天處死小鼠，取其腫瘤組織、淋巴結及脾臟。
　　 2.采用兔抗小鼠TTS多克隆抗體和免疫組化SP法檢測各組腫瘤組織、淋巴結組織TTS表達。
　　 3.Western blot半定量分析腫瘤組織、淋巴結組織T

4、TS表達差異。
　　 4.所有數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析均使用統(tǒng)計軟件包SPSS17.0處理。多組均數(shù)間的比較采用單因素方差分析，多個樣本均數(shù)間的兩兩比較采用LSD檢驗，P<0.05表明差異具有統(tǒng)計學意義。
　　 結果1.A20細胞接種后7d于小鼠右腋背部皮下可觸及腫瘤形成，直徑約0.3-0.5cm，成瘤率95％以上。處死時(接種后20d)腫瘤生長最大直徑約3-4cm。大體解剖可見腫瘤呈圓形或橢圓形，瘤體表面呈結節(jié)或分葉狀，無完整的結

5、締組織包膜，向鄰近皮膚、胸壁等組織浸潤，右腋下轉移淋巴結常增大并融合。光學顯微鏡下觀察：腫瘤組織中瘤細胞大小較一致，彌漫分布，核大而深染，胞漿量較多；腫瘤轉移淋巴結正常結構破壞，可見灶狀浸潤的腫瘤細胞團。
　　 2.TTS胞漿表達，腫瘤轉移淋巴結內可見體積較大的腫瘤細胞呈灶性浸潤，TTS陽性細胞主要集中于浸潤區(qū)。腫瘤組織中可見陽性細胞彌漫分布，胞漿量豐富，染色為棕黃色或黃褐色。與正常淋巴結相比，腫瘤組織及腫瘤轉移淋巴結TTS表達

6、均升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　 3.正常小鼠淋巴結組織中存在少量TTS表達，與正常對照相比，腫瘤組及治療組小鼠腫瘤組織TTS表達明顯升高(P<0.001、P=O.043);與腫瘤組相比，治療組TTS表達水平顯著下降(P=0.01)差異具有統(tǒng)計學意義；腫瘤轉移淋巴結TTS表達無顯著變化(P=O.695)，無統(tǒng)計學意義。
　　 結論BALB/c小鼠皮下注射5×106個A20細胞建立淋巴瘤動物模型操作簡單，