白藜蘆醇復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的制備及其體外抗腫瘤作用研究.pdf

1、目的：
　　通過對(duì)白藜蘆醇(RESVERATROL，Res)的處方前研究，制備和初步評(píng)價(jià)Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體，比較其與單一磷脂脂質(zhì)體在穩(wěn)定性和其他方面的優(yōu)勢(shì)，并初步考察Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的體外抗腫瘤活性，為其體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)研究提供參考，為Res新劑型研究提供了新的思路和研究方法。
　　方法：
　　1、建立Res的HPLC含量測(cè)定方法，探討Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體包封率的測(cè)定方法，測(cè)定Res在正辛醇/水中的油水分配系數(shù)。<

2、br>　　2、篩選Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的制備方法，并通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，以包封率指標(biāo)進(jìn)行工藝優(yōu)化，確定最佳處方。
　　3、掃描電鏡觀察Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的形態(tài)分布，馬爾文粒度分析儀測(cè)定其粒徑大小和Zeta電位，體外釋放實(shí)驗(yàn)來考察Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體的穩(wěn)定性和體外釋藥特點(diǎn)。
　　4、 MTT法檢測(cè)Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體對(duì)肝癌HepG2和肺癌A549在24h、48h和72h的生長(zhǎng)抑制作用并計(jì)算IC50值;PI單標(biāo)流式細(xì)

3、胞術(shù)考察Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體對(duì)不同腫瘤細(xì)胞周期的影響;Hochest33342單染色法觀察其對(duì)不同腫瘤細(xì)胞凋亡形態(tài)的影響。
　　結(jié)果：
　　1、結(jié)果表明Res在l～25μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，且各種輔料對(duì)其測(cè)定基本沒有干擾;以PH7.4的PBS液為洗脫液，葡聚糖凝膠柱法可以很好的分離Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體和游離Res;在37℃下，Res的油水分配系數(shù)為1.50。
　　2、采用薄膜-超聲分散法制備可以得到較高的包封率

4、，通過單因素試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)篩選的最優(yōu)處方是:磷脂濃度為4％，HSPC/SPC為1∶6，藥脂比為1∶15，且膽固醇與磷脂比為1∶3。該工藝條件下，平均包封率可達(dá)82.47％，粒徑分布均勻，批間差異較小。
　　3、制備的脂質(zhì)體外形圓整，大小均一，呈類球形;平均粒徑為89nm，電位為-43.2mv，Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體有一定的緩釋作用，體外釋放時(shí)36h可達(dá)平衡，累積釋放率為81.3％，且其對(duì)血漿的穩(wěn)定性要優(yōu)于Res大豆磷脂脂質(zhì)體。<

5、br>　　4、 Res復(fù)合磷脂脂質(zhì)體對(duì)肝癌HepG2和肺癌A549的抑制作用呈時(shí)間和濃度依賴性，對(duì)兩種癌細(xì)胞細(xì)胞周期的影響均是S期阻滯作用。
　　結(jié)論：
　　1、HPLC法準(zhǔn)確，靈敏，操作方便，提高了Res的定量檢測(cè)的效率;油水分配系數(shù)測(cè)定結(jié)果提示Res脂溶性較強(qiáng)，極性較弱，適合制成脂質(zhì)體制劑。
　　2、薄膜分散法操作簡(jiǎn)單，在實(shí)驗(yàn)室易于完成，最佳處方制得的脂質(zhì)體形態(tài)圓整，分布均勻，包封率高，穩(wěn)定性好。
　　3、R