白藜蘆醇脂質(zhì)體的制備及評(píng)價(jià).pdf

1、白藜蘆醇（RES）具有優(yōu)越的抗腫瘤性能，可作為健康食品和新藥開(kāi)發(fā)特別是抗腫瘤藥物開(kāi)發(fā)的原料，被喻為繼紫杉醇之后的又一新的綠色抗癌藥物。但是白藜蘆醇是脂溶性藥物，水溶性差，口服吸收差，沒(méi)有靶向性，靶部位幾乎不可能達(dá)到有效治療濃度，體內(nèi)代謝不穩(wěn)定，故臨床應(yīng)用受到很大限制。為此，本論文研制了RES脂質(zhì)體和脂質(zhì)體凍干粉針，以達(dá)到延長(zhǎng)藥物的半衰期，提高藥物的抗腫瘤效果，提高藥物的治療指數(shù)，減少藥物的毒副作用，增強(qiáng)藥物的臨床應(yīng)用性的目的[1-3]。

2、
　　首先建立了RES樣品HPLC測(cè)定方法，得到RES甲醇溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=166.13x+1.0476(R2=0.9996)；并對(duì)其線性范圍、精密度、回收率等參數(shù)進(jìn)行了考察，結(jié)果表明該方法符合分析要求。并采用了透析法，用pH7.4 PBS作為透析介質(zhì)分離脂質(zhì)體和游離藥物，以甲醇破壞脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)，用HPLC法測(cè)定脂質(zhì)體內(nèi)藥物濃度，最終計(jì)算包封率。通過(guò)考察空白脂質(zhì)體和游離藥物的透析情況，證明采用透析法分離脂質(zhì)體和游離藥物的方法可

3、靠[4-5]。
　　以大豆磷脂和膽固醇為原料，采用逆相蒸發(fā)法制備RES脂質(zhì)體。在處方篩選過(guò)程中，以脂質(zhì)體包封率和粒徑為考察指標(biāo)，先進(jìn)行單因素考察，包括磷脂用量、膽固醇磷脂比、藥物磷脂比和有機(jī)相水相體積比等；然后采用了正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以包封率為指標(biāo)，選擇最佳處方：RES10mg，磷脂400mg，膽固醇40mg，無(wú)水乙醚20mL，pH7.4 PBS10mL，其包封率為95％,同時(shí)在試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)在處方中加入5mol%的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-

4、聚乙二醇（DSPE-PEG2000），能夠有效提高包封率并且在一定程度上降低粒徑。通過(guò)乙醚揮發(fā)速度、梨形瓶?jī)A斜度和細(xì)胞超聲粉碎儀功率及時(shí)間等工藝條件的調(diào)整，對(duì)逆相蒸發(fā)法進(jìn)行了工藝優(yōu)化。為了提高RES脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，采用冷凍干燥法將其制成凍干粉針，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中考察了不同凍干保護(hù)劑對(duì)冷凍干燥效果的影響，最后選擇2.5%乳糖+2.5%海藻糖作為凍干保護(hù)劑[6-7]。
　　同時(shí)對(duì)RES脂質(zhì)體以及DSPE-PEG2000修飾的RES脂質(zhì)體（

5、RES-PEG）的體外釋放行為進(jìn)行了考察。首先建立了用紫外分光法測(cè)定在不同pH(5.5,6.5,7.4)的磷酸緩沖鹽溶液中RES濃度的分析方法，得到三條不同的標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)比RES脂質(zhì)體在不同pH(5.5,6.5,7.4)的磷酸緩沖鹽溶液中的釋放結(jié)果，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)所得RES脂質(zhì)體在體外釋放沒(méi)有pH依賴性，在三種pH環(huán)境下釋放速度接近；又對(duì)比了RES脂質(zhì)體、RES-PEG脂質(zhì)體和RES游離藥物在pH7.4的磷酸緩沖鹽溶液中的釋放結(jié)果，我們可以看

6、出釋放速度：RES游離藥物>RES脂質(zhì)體>RES-PEG脂質(zhì)體[8]。
　　大鼠尾靜脈注射后，考察了RES原料藥溶液、RES脂質(zhì)體和RES-PEG脂質(zhì)體的體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。首先，建立了HPLE法，以染料木黃酮為內(nèi)標(biāo)，測(cè)定大鼠體內(nèi)血漿中血藥濃度，同時(shí)用DAS2.0統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。通過(guò)大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，在相同劑量下，脂質(zhì)體組的血漿半衰期比溶液組的要長(zhǎng)，AUC是溶液組的4倍，說(shuō)明直至提足的消除比脂質(zhì)體組慢得多，脂質(zhì)體組