納米顆粒擴增金標試紙條的研究與應用.pdf

1、分子水平的生物學定量檢測需要更先進的生物分析方法。近年來在醫(yī)學、動物檢驗、食品衛(wèi)生檢驗等研究領域中，快速、靈敏、準確的分析方法在檢測細菌、病毒和農獸藥殘留上得到了很廣的發(fā)展應用。膠體金免疫層析是一種簡單、快速的免疫學檢測技術，利用金標抗體與抗原的特異反應進行檢測。這種方法也廣泛地應用在禽畜類疾病的監(jiān)測診斷中，例如對禽流感病毒、新城疫病毒及牛病毒性腹瀉病毒的診斷。膠體金技術比熒光免疫，放射性免疫及酶聯免疫法的檢測靈敏度低，如果可以使金顆粒

2、擴增，就能實現肉眼可見檢測，提高靈敏度。
　　 本研究基于膠體金免疫層析法原理，并探索形成了納米顆粒擴增膠體金免疫層析試紙條制備的技術體系。利用增敏輔助試劑的化學反應使固定在硝酸纖維素膜上的膠體金抗體抗原反應復合物的顆粒原位增長，讓膠體金原位所形成的納米顆粒染色，使金標信號顯著增強，提高了檢測靈敏度。
　　 首先利用金顆粒對蛋白質分子吸附的功能，將一種單克隆抗體與膠體金顆粒結合制備免疫檢測探針，然后在硝酸纖維素膜上，噴上

3、包被抗體作為檢測線(T線)和羊抗鼠抗體作為質控線(C線)。將被檢樣品加到樣品墊上，樣品會沿NC膜流向吸水墊，樣品中檢測物濃度大于檢出限時，金標抗體抗原結合物與固定在T線上的抗體結合，T線顯色，呈陽性；樣品中檢測物濃度小于檢出限時，T線不顯色，結果為陰性。在增敏步驟中，將一定濃度的氯金酸和抗壞血酸或鹽酸羥胺按一定比例混勻(參考專利：200810106529.6)，滴加NC膜上進行金顆粒擴大，檢測倍數可提高10～100倍。同時，利用紫外可見