基于核酸適配體的石房蛤毒素納米金試紙條檢測(cè)方法的研究與應(yīng)用.pdf

1、石房蛤毒素（STX）是一種海洋麻痹性貝類毒素，主要來源于有毒的藻類。貝類通過食用有毒藻類，蓄積在其體內(nèi)形成STX。STX毒性極強(qiáng)，對(duì)人類的致死量約為1 mg，中毒癥狀明顯，輕則引發(fā)腹瀉，重則引起休克致死。近年來，常發(fā)生由于誤食有毒貝類而引起中毒的事件。因此，研究出一種快速、靈敏的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)STX的有效監(jiān)控具有重要意義。與STX其他常用的檢測(cè)方法相比，試紙條具有以下幾個(gè)特點(diǎn)：對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單預(yù)處理，試驗(yàn)結(jié)果直觀，肉眼可見，且檢

2、測(cè)時(shí)間短，儀器設(shè)備小型化方便攜帶等。本文主要是構(gòu)建基于核酸適配體的納米金試紙條生物傳感器，采用競(jìng)爭(zhēng)法的識(shí)別機(jī)理，實(shí)現(xiàn)對(duì)石房蛤毒素的高靈敏度的快速檢測(cè)，并將其應(yīng)用到貝類產(chǎn)品毒素的檢測(cè)。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴制備核酸適配體—納米金復(fù)合材料，構(gòu)建基于核酸適配體的STX納米金試紙條，確定了STX檢測(cè)最優(yōu)條件：緩沖液為Tris-Hcl0.01 mol/L+Nacl0.6 mol/L+2％BSA，結(jié)合墊上的GNPs-DNA probe1

3、（Conjugate）復(fù)合物的量為2μL，Conjugate復(fù)合物中核酸適配體的量為2 OD，噴涂在NC膜上檢測(cè)線位置STX的DNA probe2的濃度為1μg/mL，在此條件下，信噪比最佳。⑵進(jìn)一步對(duì)核酸適配體納米金試紙條的靈敏度、重現(xiàn)性、特異性和穩(wěn)定性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示：試紙條在10~1000 ng/mL范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，y=-269.79x+1011.93， R2=0.99035，試紙條最低檢測(cè)限可達(dá)到1.3 ng/mL，且

4、該試紙條對(duì)于其他非目標(biāo)毒素（如：大田軟海綿酸、黃曲霉毒素、河豚毒素等）并物明顯的響應(yīng)信號(hào)的變化，展現(xiàn)了其良好的特異性。對(duì)0 ng/mL、10 ng/mL、200 ng/mL、800 ng/mL STX四個(gè)水平分別進(jìn)行6次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，計(jì)算得其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為21%、3%、15%和19%，說明該試紙條具有良好的重復(fù)性，且在室溫條件下8周內(nèi)保持良好的穩(wěn)定性。該核酸適配體納米金試紙條生物傳感器具有良好的分析性能，為實(shí)現(xiàn)對(duì)STX的快速檢測(cè)提供一個(gè)