革皮氏海參總皂苷促進(jìn)小鼠骨髓造血機(jī)能的作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、海參皂苷是海參的主要次生代謝產(chǎn)物,是海參體內(nèi)特有的一類(lèi)三萜類(lèi)化合物。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)急性毒性、30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)研究革皮氏海參總皂苷對(duì)小鼠或大鼠的一般毒性以及長(zhǎng)期攝入對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生的有害效應(yīng),并檢測(cè)其毒作用性質(zhì)和靶器官,觀察長(zhǎng)期攝入對(duì)機(jī)體造成的危害。在確定海參皂苷的毒作用性質(zhì)及半數(shù)致死量(median lethal dose,LD50)的基礎(chǔ)上,在其安全性應(yīng)用范圍內(nèi)來(lái)研究海參皂苷對(duì)小鼠骨髓造血機(jī)能的促進(jìn)作用。本實(shí)驗(yàn)采用連續(xù)3次腹腔注射環(huán)磷酰胺(C

2、yclophosphamide,Cy)的方法建立骨髓抑制小鼠模型。采用0.5％羧甲基纖維素調(diào)制的革皮氏海參總皂苷灌胃模型小鼠,研究其對(duì)小鼠骨髓造血功能的影響,并對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行了較系統(tǒng)和深入地研究。主要研究結(jié)果如下:
　　 革皮氏海參總皂苷對(duì)小鼠的LD50:雄性為1.08g/kg,雌性為1.1 g/kg。一次性灌胃海參皂苷,小鼠血清中尿素氮(serum urea nitrogen,BUN)、肌酐(creatinine,Cr)、谷

3、草轉(zhuǎn)氨酶(aspartate aminotarnferase,AST)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alaninetransaminase,ALT)含量同正常對(duì)照組無(wú)顯著差異,說(shuō)明海參皂苷對(duì)小鼠腎臟和肝臟功能無(wú)明顯損傷效應(yīng)。30d喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)顯示,海參皂苷對(duì)大鼠血液生化學(xué)和尿液生化學(xué)指標(biāo)均無(wú)顯著影響,說(shuō)明其對(duì)大鼠肝臟,腎臟和心血管等器官無(wú)明顯毒性損傷。另外,海參皂苷明顯促進(jìn)雄性大鼠外周血中白細(xì)胞(white bloodcell,WBC)數(shù)和血小板數(shù)(pla

4、stocyte,PLT)增加。
　　 采用細(xì)胞培養(yǎng)和組織培養(yǎng)方法,研究海參皂苷對(duì)骨髓造血功能的影響。結(jié)果表明,海參總皂苷促進(jìn)小鼠WBC、RBC、PLT和血紅蛋白(hemoglobin,Hb)含量以及網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte,RET)數(shù)量,促進(jìn)骨髓有核細(xì)胞(bone marrownucleated cell,BMNC)分裂增殖,刺激造血干細(xì)胞(hemopoietic stem cell,HSC)的增殖與分化,對(duì)體外培養(yǎng)

5、粒-單系(P＜0.01)、紅系(P＜0.05)和巨核系祖細(xì)胞(p＜0.01)集落生成有明顯的促進(jìn)作用;同時(shí)海參皂苷刺激肺、脾臟和腹腔巨噬細(xì)胞等組織中分泌多種造血生長(zhǎng)因子,促進(jìn)小鼠骨髓造血。
　　 利用流式細(xì)胞術(shù)、RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)法檢測(cè)海參總皂苷對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果顯示,海參皂苷促進(jìn)骨髓細(xì)胞從S期進(jìn)入到G2/M

6、期,同時(shí)促進(jìn)細(xì)胞G2/M期調(diào)控點(diǎn)cyclin B1基因的表達(dá),促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂;提高抑制凋亡基因bcl-2和bcl-xl mRNA的表達(dá)(p＜0.01,p＜0.01),抑制細(xì)胞凋亡。說(shuō)明海參皂苷可通過(guò)調(diào)整細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂、抑制細(xì)胞凋亡,來(lái)促進(jìn)小鼠骨髓造血功能。
　　 通過(guò)RT-PCR法檢測(cè)小鼠骨髓細(xì)胞造血生長(zhǎng)因子粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞刺激因子(granulocyre-macrophage colony-stimulating

7、factor,GM-CSF)、促紅細(xì)胞生成素受體(erythropoietin receptor,EPOR)和血小板生成素(thrombopoietin,TPO)mRNA表達(dá)。結(jié)果顯示,海參皂苷顯著促進(jìn)骨髓細(xì)胞EPOR(P＜0.05)、GM-CSF(p＜0.01)和TPO mRNA(p＜0.01)的表達(dá),推測(cè)海參皂苷通過(guò)促進(jìn)小鼠骨髓細(xì)胞合成和分泌EPO、GM-CSF或TPO,有效促進(jìn)EPO、GM-CSF或FPO與其相應(yīng)受體結(jié)合,刺激骨髓