革皮氏海參(Pearsonotheia graeffei)皂苷的制備與毒理學(xué)評價.pdf

1、海參皂苷(holothurian glycosides),又稱海參素(holothurin),是從海參中提取的三萜皂苷類成分,具有抗真菌、抗病毒、細胞毒活性、抗腫瘤、溶血、免疫調(diào)節(jié)等廣泛的生理學(xué)和藥理學(xué)活性,但同時海參皂苷有較強的溶血性,導(dǎo)致海參皂苷應(yīng)用的安全性存在很大隱患,限制了海參皂苷臨床應(yīng)用的進一步發(fā)展。本文以革皮氏海參(P.graeffei)為原料制備純化海參總皂苷,分離純化海參皂苷單體Holothurin A(HA)和Echi

2、noside A(EA),并進行定量分析;對海參總皂苷的急性毒性、致突變性、對生殖細胞的遺傳毒性以及30天毒性進行了系統(tǒng)的研究,對其安全性進行了綜合評價。主要研究結(jié)果如下:
　　 海參總皂苷及海參皂苷單體HA和EA的制備。以革皮氏海參為原料,利用高效液相色譜儀對其純度進行檢測。通過乙醇粗提取法得到海參總皂苷,測得海參總皂苷的純度為26％;利用大孔樹脂柱層析法對海參總皂苷進行純化,得到海參總皂苷的純度為48％;利用正相硅膠柱層析法

3、進行進一步純化,得到海參總皂苷純度為68％;經(jīng)反相硅膠柱層析法分離得到海參皂苷單體HA和EA,純度分別為82.6％和91.4％。;利用高效液相色譜法分離純化兩種單體后,純度分別為92.3％和95.4％。
　　 采用灌胃法一次性給予小鼠不同劑量的海參皂苷,24h后觀察小鼠死亡情況,根據(jù)Horn法,確定海參皂苷對小鼠的半數(shù)致死量為雌性為1.10g/kg,雄性為1.08g/kg;灌胃不同劑量海參皂苷14d后,海參皂苷各劑量組與正常對照

4、組相比谷丙/谷草轉(zhuǎn)氨酶、外周血象各指標(biāo)沒有顯著變化,表明該劑量的海參皂苷對小鼠肝臟有無明顯的損傷作用,對外周血成分無影響。
　　 海參皂苷無致突變作用。通過30小時受試法灌胃小鼠不同劑量的海參皂苷,小鼠處死后取骨髓細胞制片,統(tǒng)計各組小鼠骨髓細胞的微核率,結(jié)果顯示海參皂苷各劑量組小鼠骨髓細胞與正常對照組均無顯著性差異,表明海參皂苷的灌胃劑量在138～550mg/kg之間對機體無致突變的作用。
　　 海參皂苷無生殖細胞遺傳毒

5、性。連續(xù)5天灌胃不同劑量海參皂苷,35d后處死小鼠,制作小鼠精子涂片并進行觀察,統(tǒng)計各組小鼠的精子畸形率,實驗結(jié)果表明海參皂苷各劑量組的精子畸形率與正常對照組均無顯著性差異,說明海參皂苷的灌胃劑量在138～550mg/kg之間對機體無生殖細胞遺傳毒性。
　　 大鼠連續(xù)灌胃不同劑量海參皂苷(25 mg/kg、50 mg/kg和100 mg/kg)30天,結(jié)果表明長期服用海參皂苷不會對大鼠體重造成明顯影響;海參皂苷對血液中的紅細胞、

6、血紅蛋白、尿素氮、肌酐、尿酸、甘油三脂、總膽固醇以及低密度脂蛋白膽固醇的含量都無顯著影響,對尿液中的尿素氮、肌酐、尿素等的含量也無顯著影響;海參皂苷可以顯著增加雄性大鼠白細胞與血小板的數(shù)量,說明海參皂苷可以增加白細胞與血小板的增殖能力;海參皂苷可以顯著提高血清中高密度脂蛋白膽固醇的含量,說明海參皂苷可以促進脂質(zhì)代謝,減緩脂肪積累;通過組織形態(tài)學(xué)檢測發(fā)現(xiàn),海參皂苷對肝臟、心臟、腎臟、肺、胃等組織無毒性作用,但會引起睪丸、卵巢的損傷。