脾藏神理論探討——脾虛模型腦內(nèi)神經(jīng)肽受體基因表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：從五臟藏神理論出發(fā)，通過實(shí)驗(yàn)研究，以期揭示脾虛對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶影響的機(jī)制，探討脾胃與神志之間的密切聯(lián)系，深化脾胃與神志的理論和實(shí)驗(yàn)研究，為中醫(yī)臨床從脾胃論治神志疾病提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：在理論方面：五臟藏神是中醫(yī)藏象理論的重要組成部分，這一理論認(rèn)為人的神志活動(dòng)可分為神、魂、魄、意、志五種基本的類別，而由五臟分別所主。在五臟皆藏神的基礎(chǔ)上，中醫(yī)理論認(rèn)為脾胃轉(zhuǎn)樞氣機(jī)的整體協(xié)調(diào)是神志活動(dòng)正常的關(guān)鍵。其二，脾胃是“后天之本”，氣血化

2、生之源，灌溉滋養(yǎng)周身，提供了神志活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。其三，脾胃運(yùn)化水濕。同時(shí)探討了脾藏意主思，“意”和“思”的含義，從而提供了脾與神志活動(dòng)關(guān)系密切的理論基礎(chǔ)。 在實(shí)驗(yàn)方面：以Wistar大鼠為研究對(duì)象，分為正常組、模型組、治療組(造模加灌胃歸脾湯)、A方對(duì)照組(造模加灌胃柴胡疏肝散)、B方對(duì)照組(造模加灌胃天王補(bǔ)心丹)。采用苦降瀉下、飲食失節(jié)、勞倦過度相結(jié)合的方法，復(fù)制脾虛動(dòng)物模型。觀察大鼠的體重、進(jìn)食量、外觀表現(xiàn)和動(dòng)態(tài)變化等對(duì)模型

3、進(jìn)行篩選。采用免疫組化方法檢測(cè)即早基因C-JUN的表達(dá)變化，原位雜交方法檢測(cè)即早基因C-FOSmRNA、神經(jīng)肽受體SSRmRNA、OTRmRNA的表達(dá)變化。并進(jìn)行HE常規(guī)染色檢測(cè)。 結(jié)果：1脾虛模型復(fù)制結(jié)果采用苦降瀉下、飲食失節(jié)、勞倦過度相結(jié)合的方法，復(fù)制脾虛大鼠模型，從第三天開始出現(xiàn)類似脾虛的癥狀：大便溏瀉，消瘦，扎堆，精神萎靡等。第八天癥狀最重，除正常組外，余四組均80％以上的大鼠出現(xiàn)食少，稀便或粘液便，肛周毛色污穢，懶動(dòng)，

4、扎堆，瞇眼，乏力，耳尖色淡，畏寒，尾涼，體重不增或增加緩慢甚或降低，背毛松散，毛色不榮或掉毛發(fā)枯表現(xiàn)。 2HE染色結(jié)果正常組大鼠海馬CA1區(qū)、下丘腦腹側(cè)核、前額葉皮層部位神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，無異常變化，細(xì)胞核呈均勻淡藍(lán)色或藍(lán)色，細(xì)胞線清晰，胞核、胞質(zhì)清晰：模型組大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞排列紊亂、松散，細(xì)胞脫失明顯，甚至僅見少量殘存的不規(guī)則細(xì)胞，細(xì)胞周圍出現(xiàn)間隙，核固縮，染色質(zhì)深染，或細(xì)胞核僅呈很淡的藍(lán)色甚至藍(lán)色消失；在下丘腦腹側(cè)核、前

5、額葉皮層部位大部分出現(xiàn)核固縮，染色質(zhì)深染，細(xì)胞體縮小，呈橢圓形、梭形、三角形和不規(guī)則形等多種形態(tài)，核仁看不清的現(xiàn)象；治療組大鼠神經(jīng)細(xì)胞介于正常組模型組之間，神經(jīng)細(xì)胞核固縮現(xiàn)象明顯減輕，形態(tài)較正常，形態(tài)、數(shù)量及分布更接近于正常組；A方對(duì)照組與B方對(duì)照組大鼠神經(jīng)細(xì)胞均有明顯的核固縮，染色質(zhì)深染現(xiàn)象，形態(tài)、數(shù)量及分布接近于模型組。 3C-JUN免疫組化檢測(cè)結(jié)果大鼠海馬CA1區(qū)、下丘腦腹側(cè)核、前額葉皮層C-JUN免疫陽性細(xì)胞的表達(dá)：模型

6、組c-jun免疫陽性反應(yīng)物的MOD值明顯升高，與正常組比較，差異極顯著(P＜0.01)；治療組c-jun免疫陽性反應(yīng)物的MOD值明顯降低，與模型組比較，差異極顯著(P＜0.01)；A方對(duì)照組和B方對(duì)照組c-jun免疫陽性反應(yīng)物的MOD值與模型組相似，與模型組比較均無顯著差異。 4C-FOSmRNA原位雜交檢測(cè)結(jié)果大鼠海馬CA1區(qū)、下丘腦腹側(cè)核、前額葉皮層C-FOSmRNA的表達(dá)：模型組c-fosmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值明顯升

7、高，與正常組比較，差異極顯著(P＜0.01)；治療組c-fosmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值明顯降低，與模型組比較，差異極顯著(P＜0.01)；A方對(duì)照組和B方對(duì)照組c-fosmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值與模型組相似，與模型組比較均無顯著差異。 5SSRmRNA原位雜交檢測(cè)結(jié)果大鼠海馬CA1區(qū)、下丘腦腹側(cè)核、前額葉皮層SSRmRNA的表達(dá)：模型組SSRmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值明顯降低，與正常組比較，差異極顯著(P＜0.01)；

8、治療組在海馬CA1區(qū)，SSRmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值有一定程度的升高，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05)，在下丘腦腹側(cè)核、前額葉皮層，SSRmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值明顯升高，與模型組比較，差異極顯著(P＜0.01)；A方對(duì)照組SSRmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值與模型組相似，與模型組比較無顯著差異；B方對(duì)照組在下丘腦腹側(cè)核SSRmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值明顯升高，與模型組比較，差異極顯著(P＜0.01)，而與正常組比較，無顯

9、著差異，在海馬CA1區(qū)、前額葉皮層，SSRmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值與模型組相似，其統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)與模型組無顯著差異。 6OTRmRNA原位雜交檢測(cè)結(jié)果大鼠海馬CA1區(qū)、下丘腦腹側(cè)核、前額葉皮層OTRmRNA的表達(dá)：模型組OTRmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值明顯升高，與正常組比較，差異極顯著(P＜0.01)；治療組OTRmRNA陽性反應(yīng)物的MOD值明顯降低，與模型組比較，差異極顯著(P＜0.01)；A方對(duì)照組和B方對(duì)照組OTRmRNA

10、陽性反應(yīng)物的MOD值與模型組相似，與模型組比較均無顯著差異。 結(jié)論：1采用苦降瀉下、飲食失節(jié)加勞倦過度的方法復(fù)制脾虛模型，模型復(fù)制成功。 2脾虛模型大鼠HE染色可見到變性的神經(jīng)元，個(gè)別腦區(qū)出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞凝固性壞死。結(jié)果說明脾虛引起動(dòng)物腦部部分損傷，造成學(xué)習(xí)記憶功能障礙。歸脾湯治療組大鼠HE染色未見到變性的神經(jīng)元，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)及分布與正常組相似，結(jié)果說明歸脾湯對(duì)脾虛大鼠學(xué)習(xí)記憶能力有明顯的改善作用。 3脾虛大鼠腦內(nèi)c