二化螟神經(jīng)組織轉(zhuǎn)錄組分析與部分神經(jīng)肽及神經(jīng)肽受體的基因克隆.pdf

1、二化螟[Chilo suppressalis(Walker)]是重要的水稻鉆蛀性害蟲(chóng)。二化螟的抗藥性一直以來(lái)是水稻害蟲(chóng)防治中的重要課題之一。國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)二化螟的研究大多數(shù)集中在生理生化指標(biāo)檢測(cè)或者少數(shù)基因的研究，其轉(zhuǎn)錄組層面的研究還未見(jiàn)發(fā)現(xiàn)。
　　 近年來(lái)，由于高通量測(cè)序技術(shù)具有成本較低，測(cè)序容量較高的特點(diǎn)，且可以直接在面對(duì)上百萬(wàn)mRNA時(shí)直接獲得基因的表達(dá)信息而不依賴基因的克隆和注釋，此技術(shù)被越來(lái)越廣泛的應(yīng)用于轉(zhuǎn)錄組譜的分析。

2、為了深入了解二化螟的遺傳信息，本研究應(yīng)用了新一代高通量測(cè)序技術(shù)Illumian's Solexa平臺(tái)對(duì)二化螟老熟幼蟲(chóng)的神經(jīng)組織的轉(zhuǎn)錄組進(jìn)行測(cè)序，并結(jié)合SOAPdenovo拼接等聚類分析軟件，獲取了多個(gè)假定的神經(jīng)肽受體及其配體的基因，具體研究結(jié)果如下:
　　 1:測(cè)序的數(shù)據(jù)產(chǎn)量堿基數(shù)約為2，215，507，650nt，總共進(jìn)行了26，022,226次讀數(shù)，每次讀長(zhǎng)為75bp，產(chǎn)生總共702，465個(gè)contig，拼接之后獲得146

3、，770 scaffolds，平均長(zhǎng)度233nt。最后得到了76，016條Unigene，平均長(zhǎng)度440nt。
　　 2:通過(guò)BLASTx將二化螟神經(jīng)組織轉(zhuǎn)錄組序列依次對(duì)比到Nr，SWISS-PROT、KEGG和COG數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行功能注釋(Evalue＜10-5)，對(duì)比到Nr數(shù)據(jù)庫(kù)的有28，704條unigene，對(duì)比到 SWISS-PROT數(shù)據(jù)庫(kù)的有20,964條unigene，對(duì)比到 KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)的有16，693條unige

4、ne，對(duì)比到COG數(shù)據(jù)庫(kù)的有8，587條unigene，對(duì)比到GO數(shù)據(jù)庫(kù)的有6，694條unigene。其中，對(duì)比到物種Tribolium castaneum中的unigene數(shù)量最多，有5，377條unigene。通過(guò)進(jìn)一步Blastn比對(duì)，根據(jù)“基因結(jié)構(gòu)相似，功能同源”的原理，在二化螟神經(jīng)組織轉(zhuǎn)錄組文庫(kù)中篩選到14條神經(jīng)肽相關(guān)基因以及50條神經(jīng)肽受體相關(guān)基因。
　　 3:對(duì)14條神經(jīng)肽相關(guān)基因及50條神經(jīng)肽受體相關(guān)基因進(jìn)行克