神經(jīng)肽Y基因轉(zhuǎn)錄、剪接和變異與雞攝食和生長(zhǎng)的關(guān)聯(lián)分析.pdf

1、神經(jīng)肽Y（Neuropeptide Y，NPY）屬于胰多肽家族，廣泛分布于動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)和外周神經(jīng)系統(tǒng)，尤其在端腦、視前區(qū)以及下丘腦含量豐富。研究證實(shí)，NPY是動(dòng)物攝食和能量代謝調(diào)控的候選基因之一。動(dòng)物下丘腦內(nèi)的弓狀核（Arcuate nucleus，ARC；雞為漏斗核：Infundibular nucleus，IN）、室旁核（Paraventricular nucleus，PVN）和外側(cè)區(qū)（Lateral hypothalamic

2、area，LHA）是重要的采食調(diào)節(jié)中樞。長(zhǎng)期的定向選育形成了不同生產(chǎn)性能的雞種，肉雞以產(chǎn)肉為目的，前期生長(zhǎng)代謝旺盛，采食量大；而蛋雞產(chǎn)蛋性能優(yōu)異，生長(zhǎng)速度較慢，采食量比肉雞小。本研究從NPY基因轉(zhuǎn)錄水平、選擇性剪接形式和單核甘酸多態(tài)（Single nucleotide polymorphisms，SNPs）與雞攝食和能量代謝的關(guān)聯(lián)進(jìn)行分析，以期從分子水平闡明NPY對(duì)雞攝食和能量代謝的影響提供理論依據(jù)。
　　 試驗(yàn)一：下丘腦神經(jīng)肽

3、YmRNA水平與雞攝食的關(guān)聯(lián)分析
　　 建立了利用TaqMan探針檢測(cè)雞下丘腦NPY mRNA水平的RT-PCR方法，比較分析了NPY mRNA在采食量迥異的2個(gè)品種--海蘭蛋雞和Ross肉雞下丘腦IN、PVN和LHA的轉(zhuǎn)錄水平的差異。結(jié)果顯示，14日齡Ross肉雞的體重和24小時(shí)采食量分別是相同日齡海蘭蛋雞的1.7倍和1.5倍，品種間差異極顯著（P<0.01）。海蘭蛋雞下丘腦IN、PVN和LHA的NPY mRNA水平顯著高于R

4、oss肉雞。肉雞下丘腦IN內(nèi)NPY的mRNA水平顯著高于LHA和PVN，LHA和PVN間無(wú)顯著差異；而蛋雞下丘腦IN和PVN內(nèi)NPY的mRNA水平顯著高于LHA，IN和PVN間無(wú)顯著差異。由此，NPY mRNA在不同雞種及組織間的表達(dá)存在差異，單純從轉(zhuǎn)錄水平高低不能夠直接解釋NPY在攝食調(diào)控中所發(fā)揮的促采食作用。
　　 試驗(yàn)二：下丘腦神經(jīng)肽Y mRNA剪接與雞攝食的關(guān)聯(lián)分析
　　 基因剪接位點(diǎn)和拼接方式的改變可使基因表達(dá)

5、出多個(gè)不同的相關(guān)蛋白產(chǎn)物，從而影響其生理功能。利用5’RACE和3’RACE技術(shù)檢測(cè)分析了AA肉雞和羅曼蛋雞下丘腦NPY基因mRNA剪接方式差異。結(jié)果顯示：NPY在肉雞cDNA3’端存在2種不同形式的剪接片段，短序列出現(xiàn)了mRNA3’端終止現(xiàn)象。長(zhǎng)序列3’端的82bp核苷酸序列屬于非編碼序列，未參與編碼相應(yīng)蛋白質(zhì)的氨基酸序列；蛋雞cDNA5’端發(fā)生的79bp缺失位于編碼區(qū)，導(dǎo)致相應(yīng)位點(diǎn)的編碼蛋白產(chǎn)物發(fā)生改變，44個(gè)氨基酸序列缺失，其中包

6、括信號(hào)肽和部分成熟肽序列，并造成與受體的結(jié)合位點(diǎn)消失，從而影響NPY的分泌和表達(dá)活性。推測(cè)NPY mRNA剪接方式的差異可能是造成蛋雞、肉雞采食量和能量代謝迥異的部分原因之一。
　　 試驗(yàn)三：NPY基因SNPs與雞攝食和脂肪沉積的關(guān)聯(lián)分析
　　 本研究利用PCR-SSCP方法在AA雞NPY基因5’UTR和內(nèi)含子2序列中搜尋SNPs，并結(jié)合生產(chǎn)資料，分析不同基因型個(gè)體與生產(chǎn)和屠體性狀的關(guān)聯(lián)。結(jié)果在擴(kuò)增NPY基因內(nèi)含子2的P

7、12、P13和P143對(duì)引物中都檢測(cè)到了多態(tài)位點(diǎn)的存在，分別為：SNPP12（2341 TCT插入、A2342T，T2343C、A2344T、A2345T和C2347G）和SNPP13P14（T2521C、T2597C、T2623C、C2704T、T2776G、T2787C和A2821G），且SNPP12和SNPP13～14以單倍型的方式連鎖遺傳。相關(guān)分析結(jié)果顯示，SNPP12與AA肉雞6周齡腹脂重和腹脂率顯著相關(guān)（P<0.05），其中

8、突變基因型BB個(gè)體的腹脂沉積有增加的趨勢(shì)。SNPP13～14與3周齡采食量和6周齡肝重顯著相關(guān)（P<0.05），且BB型個(gè)體的腿肌率顯著高于AA型個(gè)體（P<0.05）。上述結(jié)果表明，NPY突變基因型BB型可能是能量轉(zhuǎn)化和脂肪沉積的有利基因型。
　　 綜上所述，蛋雞的NPY mRNA水平顯著高于肉雞，檢測(cè)出蛋雞的NPY mRNA存在剪接現(xiàn)象，使其信號(hào)肽和部分成熟肽序列缺失，可能影響NPY蛋白的分泌和表達(dá)，導(dǎo)致生物活性降低，NPY