神經(jīng)肽Y與下肢動脈硬化性閉塞癥的相關(guān)研究.pdf

1、本研究分為三部分： 第一部分：神經(jīng)肽Y在下肢硬化性閉塞動脈中的分布與表達(dá) 目的：探討動脈硬化性閉塞癥(arteriosclerosisobliterans，ASO)患者動脈病理學(xué)改變及交感神經(jīng)遞質(zhì)神經(jīng)肽Y(neuropeptideY，NPY)在動脈壁中的變化情況，為揭示NPY在ASO發(fā)病過程中的作用提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。 材料與方法：對臨床收集的8例因下肢ASO截肢的ASO組動脈和5例因車禍截肢的對照組動脈行HE染色和

2、NPY免疫組化染色，在光學(xué)顯微鏡下攝片，通過計算機(jī)圖像分析軟件對比分析兩組動脈的病理形態(tài)學(xué)圖像。 結(jié)果：HE染色顯示：ASO組動脈呈典型的AS表現(xiàn)，可以見到AS的典型改變：內(nèi)膜中膜增生、大量泡沫細(xì)胞出現(xiàn)、膽固醇結(jié)晶、鈣化、血栓形成及管腔嚴(yán)重狹窄閉塞；而對照組動脈結(jié)果呈正常動脈結(jié)構(gòu)。NPY免疫組化染色：ASO組動脈外膜中NPY陽性物質(zhì)明顯較對照組增多，積分灰度顯著增大(P＜0.05)。 結(jié)論：ASO患者下肢動脈發(fā)生顯著的動

3、脈粥樣硬化病變，其外膜交感神經(jīng)原性NPY顯著增加。 第二部分：下肢動脈硬化性閉塞癥血管腔內(nèi)治療前后血漿神經(jīng)肽Y動態(tài)變化的研究 目的：探討下肢ASO患者血漿神經(jīng)肽Y在血管腔內(nèi)治療前后的動態(tài)變化及臨床意義。 材料與方法：采用放射免疫法動態(tài)分析15例健康體檢者和13例行血管腔內(nèi)治療的下肢ASO患者腔內(nèi)治療前后不同時間的血漿NPY水平變化，并比較ASO患者腔內(nèi)治療前后踝肱指數(shù)的變化。 結(jié)果：ASO患者血漿NPY水

4、平在腔內(nèi)治療前明顯高于健康體檢者，腔內(nèi)治療后即刻繼續(xù)升高到最高峰，之后逐步降低。腔內(nèi)治療后第三天ASO患者ABI較治療前顯著升高，臨床癥狀明顯改善。 結(jié)論：ASO患者血漿NPY在嚴(yán)重缺血狀態(tài)下釋放增加，行腔內(nèi)治療后即刻呈上升趨勢，但隨著缺血狀態(tài)的改善逐漸趨于正常水平。 第三部分：神經(jīng)肽Y基因單核苷酸多態(tài)性位點與下肢動脈硬化性閉塞癥相關(guān)性分析 目的：探索NPY基因的6個目的SNP位點(rs5574，rs16135，

5、rs1616139，rs16147，rs16148和rs16476)在ASO人群中的多態(tài)性狀況，了解這些多態(tài)性與ASO的相關(guān)性。 材料與方法：分別采集100個ASO患者和100個健康體檢人群的靜脈血標(biāo)本作為ASO組和對照組，用全血基因組DNA抽提試劑盒抽提所有樣本的基因組DNA，使用SnaPshot技術(shù)對各個樣本的目的SNP位點進(jìn)行基因分型，采用halpoview和SPSS統(tǒng)計軟件對目的SNP進(jìn)行連鎖不平衡和單倍型分析。

6、 結(jié)果：各個位點符合Hardy-Weinberg平衡(HW-P值＞0.01)；6個目的位點中，rs16139位點在本研究人群中不存在多態(tài)性，其它5個位點在200個樣本中存在多態(tài)性；這5個位點相互間存在不同程度的連鎖不平衡，最強(qiáng)的連鎖不平衡發(fā)生在rs5574與rs16476兩位點之間(D’=1，r2=0.855及LOD=70.48)：而且rs5574與rs16476兩位點與疾病呈顯著關(guān)聯(lián)(P＜0.05)；由rs5574與rs16476兩位

7、點組成的單倍型中，出現(xiàn)頻率較高的兩種為CA和TC，CA單倍型在對照組中出現(xiàn)的比例較高[OR=0.4511，95％置信區(qū)間為(0.3006，0.6771)]，TC單倍型在ASO組中出現(xiàn)的比例較高[OR=1.789，95％置信區(qū)間為(1.189，2.6917)]。 結(jié)論：在本研究的目的SNP中，神經(jīng)肽Y基因的rs5574和rs16476位點與ASO密切相關(guān)，這兩個位點間存在強(qiáng)連鎖不平衡關(guān)系，由它們組成的TC單倍型在ASO人群中發(fā)病率