先天性腎盂輸尿管連接部梗阻（UPJO）神經肌肉連接（NMJ）的免疫組織化學研究.pdf

1、[目的]先天性腎盂腎尿管連接部梗阻所致腎積水(hydronephrsis due to ureteropelvicjunction obstruction)是小兒常見的泌尿系畸形，近年來，產前超聲檢查發(fā)現約1000名胎兒中即有1例腎盂輸尿管連接處狹窄所致腎積水。男性多于女性，左側多于右側，雙側也不少見。本病發(fā)病率高且有逐漸增加趨勢，因此受到國內外普遍重視。 近年來，由于組織學、組織化學、電鏡、免疫組化等研究手段的進步，人們對其病

2、因、病理生理、組織與胚胎發(fā)育、診斷治療等研究均有很大進步，有關先天性腎盂輸尿管連接部梗阻病因的研究已取得了重大進展，揭示出形態(tài)學的異常主要表現在，輸尿管肌層發(fā)育障礙，平滑肌細胞相互分離，其細胞器不同程度異常，神經節(jié)細胞發(fā)育異?；蛉狈Γ喾N類型的神經纖維增生或缺乏以及輸尿管壁起搏細胞異常，形態(tài)學的異常表明輸尿管神經系統(tǒng)發(fā)育缺陷可能是輸尿管連接部.梗阻的根本病因；隨著組化及免疫組化的廣泛應用，已證明輸尿管內包含多種類型的神經，并且這些神經在

3、輸尿管蠕動中起重要作用<'[1]>，Rolle<'[2]>等采用整裝制片技術用免疫組化方法研究豬的輸尿管神經分布時發(fā)現腎盞、腎盂、腎盂輸尿管連接處及輸尿管間存在相互連接的神經網，從而認為輸尿管內源性神經在調節(jié)輸尿管蠕動波的傳播中起作用；Knerr<'[3]>的研究發(fā)現腎盂輸尿管連接處狹窄段的氮能神經元及神經纖維明顯減少，nNos的mRNA表達明顯降低，使NO為NANL神經抑制性作用減弱，使平滑肌松弛能力降低，使腎盂輸尿管連接處持續(xù)的收縮

4、而狹窄，導致腎積水。盡管目前已確定在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻處神經系統(tǒng)異常包括神經節(jié)細胞、神經纖維和cajal間質細胞缺乏、P物質、血管活性肽(VIP)能神經及一氧化氮陽性神經叢缺乏，這些缺陷可導致病變部輸尿管功能障礙，但對病變部真正的病理生理機制還未完全明了。國際上對腎盂輸尿管連接部的神經末梢即神經肌肉連接(NMJ)的研究觀察報告較少。本課題采用免疫組織化學方法，用突觸素(synaptophysin，SY)和神經絲蛋白(neurof

5、ilaments，NF)對先天性腎盂輸尿管連接部梗阻部神經肌肉連接(NMJ)進行研究，以探明其神經肌肉連接的分布并探討其與先天性腎盂輸尿管連接部梗阻發(fā)病機制之間的關系。 [方法] 1．臨床資料：本組20例均經臨床診斷為先天性腎盂輸尿管連接部梗阻癥，并經術后病理診斷符合先天性腎盂輸尿管連接部梗阻，病理資料完整?；颊吣挲g1個月～10歲。男13例，女7例。10例正常UPJ組織標本(來自尸檢)取自我院病理科存檔蠟塊作為對照。

6、 2.突觸素(SY)和神經絲蛋白(NF)腎盂輸尿管連接部梗阻神經肌肉連接(NMJ)標記：羊抗鼠突觸素(SYN)、羊抗鼠神經絲蛋白(NF)為特異性一抗，取正常對照組及先天性腎盂輸尿管連接部梗阻狹窄段標本，10％甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋、切片、脫蠟、PBS液多次沖洗，每張切片滴加50μl的第一抗體，37℃孵育30～60min后4℃冰箱過夜，DAB顯色劑顯色，自來水沖洗，蘇木素復染，中性樹膠封固. 3、結果判定方法：光鏡下觀察，突觸

7、素和神經細絲陽性反應均為棕黃或棕色顆粒，分布于腎盂輸尿管連接部環(huán)形平滑肌層細胞間。變性的神經節(jié)細胞表現為細胞境界不清，部分節(jié)細胞細胞核消失。突觸素和神經細絲的免疫反應分布密度按以下標準進行半定量分級：一(陰性)：無陽性免疫反應存在：+(弱陽性)：肌層有少量陽性表達，分布密度低：++(陽性)：肌層有中等量的免疫反應陽性表達； +++(強陽性)：肌層有大量的免疫反應陽性表達。 4、統(tǒng)計學方法：采用SPSS10.0軟件，卡方

8、檢驗。 [結果] 1、突觸素(SY)免疫反應性表達：正常對照組突觸素的免疫反應廣泛存在。在平滑肌層的神經節(jié)周圍發(fā)現了較密集的突觸素免疫反應，所有標本均呈強陽性表達，在環(huán)行平滑肌層，存在密集的突觸素免疫反應，所有標本均呈強陽性表達。先天性腎盂輸尿管連接部梗阻移行段，突觸素的免疫反應與神經節(jié)細胞的形態(tài)密切相關。在神經節(jié)細胞基本正常的環(huán)形平滑肌層，發(fā)現了陽性的突觸素免疫反應，在神經節(jié)細胞變性的環(huán)形平滑肌層，發(fā)現了弱陽性的突

9、觸素免疫反應。在狹窄段神經節(jié)細胞缺乏，其環(huán)形平滑肌層突觸素的免疫反應呈陰性表達，少部分標本呈弱陽性表達。與正常對照組及腎盂輸尿管連接部梗阻狹窄段有神經節(jié)細胞段相比，其差異均具有顯著性。 2、神經細絲(NF)免疫反應性表達：正常對照組的神經細絲的免疫反應廣泛存在。在平滑肌層的神經節(jié)發(fā)現了較密集的神經細絲免疫反應，所有標本均呈強陽性表達，在環(huán)行平滑肌層，存在密集的突觸素免疫反應，所有標本均呈強陽性表達。在先天性腎盂輸尿管連接部梗阻移

10、行段，神經細絲免疫反應亦與神經節(jié)細胞的形態(tài)與分布密切相關。在形態(tài)與分布基本正常的神經節(jié)細胞的環(huán)形平滑肌層，發(fā)現了陽性的神經細絲免疫反應，在神經節(jié)細胞變性的環(huán)形平滑肌層，發(fā)現了弱陽性的神經細絲免疫反應。在病變段神經節(jié)細胞缺乏，其平滑肌層神經細絲的免疫反應呈陰性表達，少部分標本呈弱陽性表達。與正常對照組及移行段有神經節(jié)細胞段相比，其差異均具有顯著性。 [結論]正常神經支配的平滑肌具有肌肉組織的共性，如興奮性、收縮性和傳導性，但平滑肌

11、的結構、舒縮特性及神經支配，都與骨骼肌、心肌有明顯差異。如果平滑肌失去正常的神經支配會發(fā)生怎樣的變化呢?美國著名的生理學家Cannon早在20世紀上半葉對人體的很多器官如骨骼肌、平滑肌及許多腺體進行了大量失神經支配的研究，發(fā)現失去神經支配的平滑肌因處于痙攣狀態(tài)而僵硬無蠕動，且對刺激異常敏感。其研究結果被后人承認并稱為Cannon定律(Cannon and Rosenblueth’S Law ofdenervation)。眾所周知內源性神

12、經元像運動神經元那樣通過軸突即節(jié)后纖維與環(huán)形平滑肌建立密切的聯(lián)系，其結合點稱為神經肌肉連接(NMJ)，我們的研究就證明了在正常輸尿管的環(huán)行平滑肌區(qū)域存在豐富的突觸素。隨著研究的進一步深入，逐漸發(fā)現病變段肽能神經、一氧化氮神經的異常，另外還有Cajal間質細胞(起搏細胞)異常，這些異常表明輸尿管神經系統(tǒng)發(fā)育缺陷可能是UPJO發(fā)病的根本原因。盡管目前關于先天性腎盂輸尿管連接部梗阻的病理生理尚有爭論，但綜合國外一些學者的研究及本課題的研究，先