腎透明細(xì)胞癌TCF19基因選擇性剪接異構(gòu)體的類型和表達(dá)特點(diǎn).pdf

1、[目的]探索人腎透明細(xì)胞癌(clear cell renal cell carcinoma，ccRCC)是否存在與細(xì)胞生長調(diào)節(jié)相關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子19(TCF19)選擇性剪接異構(gòu)體，探索其表達(dá)特點(diǎn)及其與ccRCC發(fā)生的關(guān)系。
　　 [方法]采用cDNA基因表達(dá)譜芯片研究實(shí)驗(yàn)室建立的漢族人能夠無限傳代的2株在動(dòng)物模型中已證實(shí)具有轉(zhuǎn)移潛能的RCC細(xì)胞系(RCC05-TXJ、RCC05-ZYJ)基因表達(dá)譜，從中選取TCF19為興趣基因。通過

2、選擇性剪接數(shù)據(jù)庫(A1ternative Splicing Database，ASD)對基因TCF19可能存在的選擇性剪接異構(gòu)體進(jìn)行預(yù)測分析。針對預(yù)測結(jié)果，使用Primer Premier5.0及Oligo6.0軟件設(shè)計(jì)5種預(yù)測異構(gòu)體的RT-PCR引物，進(jìn)行PCR反應(yīng)，將PCR產(chǎn)物凝膠回收，與pMD18-T載體連接，經(jīng)α-篩選后轉(zhuǎn)染DH5α感受態(tài)細(xì)胞，菌液送測序，應(yīng)用計(jì)算機(jī)軟件進(jìn)行序列的比對分析。經(jīng)驗(yàn)證從組織中擴(kuò)增的產(chǎn)物與生物信息學(xué)預(yù)測

3、結(jié)果一致，確認(rèn)為新的選擇性剪接異構(gòu)體后，設(shè)計(jì)Realtime引物，在32例原發(fā)癌組織及癌旁組織樣本中定量檢測TCF19-1、TCF19-3選擇性剪接異構(gòu)體的表達(dá)水平及差異。ccRCC原發(fā)腫瘤標(biāo)本來源于2005年1月-2008年12月長海醫(yī)院泌尿外科腎癌根治術(shù)的患者，其中包括32例ccRCC原位組織及其相應(yīng)癌旁組織。男性22例，女性10例，平均年齡為52.86歲，最小年齡為36歲，最大為78歲，經(jīng)病理證實(shí)，均為腎透明細(xì)胞癌。
　　

4、 [結(jié)果] ccRCC組織中存在兩種新型TCF19替換剪接異構(gòu)體(TCF19-1、TCF19-3)。Real-time RT-PCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)這兩種異構(gòu)體在癌和癌旁組織中均表達(dá)，但TCF19-1在原發(fā)癌組織中表達(dá)率遠(yuǎn)高于癌旁組織(P＜0.05)；TCF19-3在癌旁組織中的表達(dá)率略高于原發(fā)癌組織，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.082)。
　　 [結(jié)論]首次發(fā)現(xiàn)ccRCC組織中存在兩種TCF19選擇性剪接異構(gòu)體TCF19-1和TCF1