MicroRNA-363在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及其靶基因研究.pdf

1、目的:評(píng)估m(xù)iR-363在不同腎組織和不同腎細(xì)胞株之間的表達(dá)差異，初步判斷miR-363在腎癌的發(fā)生和進(jìn)展中可能扮演的角色，同時(shí)利用Targetscan預(yù)測(cè)miR-363的靶基因?yàn)楹罄m(xù)的功能研究做準(zhǔn)備。
　　材料和方法:收集中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院37例配對(duì)的腎透明細(xì)胞癌腫瘤與癌旁組織標(biāo)本。培養(yǎng)正常人腎近曲小管上皮細(xì)胞株HKC、HK2和人胚腎細(xì)胞系293T以及腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O、769P、Caki-1、SN12-PM6。逆轉(zhuǎn)

2、錄miR-363為cDNA模板，熒光定量PCR采用SYBER Green染料法比較Ct值。Targetscan預(yù)測(cè)miR-363的靶基因，熒光素酶實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，檢測(cè)其在腫瘤與瘤旁組織中的mRNA表達(dá)差異。
　　結(jié)果:miR-363在瘤旁組織中較腫瘤組織中高表達(dá)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miR-363在正常細(xì)胞株HKC、HK2中較腫瘤細(xì)胞株769P、786O、Caki-1和SN12-PM6高表達(dá)。軟件預(yù)測(cè)其靶基因?yàn)镕NIP1，熒光素酶實(shí)驗(yàn)表明

3、，miR-363能夠通過作用于FNIP1基因的3'-UTR的特定位點(diǎn)，對(duì)其表達(dá)進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)。FNIP1在瘤旁組織中較腫瘤組織中低表達(dá)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。FNIP1在腫瘤細(xì)胞株769P、786O、Caki-1和SN12-PM6較正常細(xì)胞株HKC、HK2中高表達(dá)。
　　結(jié)論:miR-363可能在腎癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用，抑制腎癌發(fā)生，熒光素酶實(shí)驗(yàn)表明，miR-363能夠通過作用于FNIP1基因的3'-UTR的特定位點(diǎn)，對(duì)其表達(dá)