sCD40L聯(lián)合LY294002對(duì)胃癌AGS細(xì)胞生長(zhǎng)及侵襲轉(zhuǎn)移影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分sCD40L對(duì)胃癌AGS細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
　　 目的:探討sCD40L，（可溶性CD40配體）對(duì)胃癌AGS細(xì)胞體外生長(zhǎng)和凋亡的影響。
　　 方法:采用不同濃度sCD40L處理胃癌AGS細(xì)胞，四氮唑鹽（MTT）法檢測(cè)AGS細(xì)胞經(jīng)sCD40L作用后生存率的變化，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)AGS細(xì)胞周期和凋亡的變化。
　　 結(jié)果:MTT結(jié)果顯示一定濃度的sCD40L可抑制AGS細(xì)胞的生長(zhǎng)，并隨著濃度的增加和作用時(shí)間

2、的延長(zhǎng)而明顯增強(qiáng)（P<0.05）。流式細(xì)胞術(shù)顯示AGS細(xì)胞經(jīng)sCD40L作用48h后，細(xì)胞周期阻滯于G1期，G1期細(xì)胞比例上升，S期細(xì)胞比例下降，并呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性（P<0.05），AGS細(xì)胞經(jīng)sCD40L作用48h后，細(xì)胞無(wú)明顯的凋亡現(xiàn)象（凋亡率<5％）。
　　 結(jié)論:sCD40L通過(guò)阻滯細(xì)胞周期抑制胃癌AGS細(xì)胞生長(zhǎng)，作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性。
　　 第二部分LY294002對(duì)胃癌AGS細(xì)胞生長(zhǎng)的影響
　　 目的

3、探討LY294002（P13K/Akt信號(hào)通路特異性阻斷劑）對(duì)胃癌AGS細(xì)胞體外生長(zhǎng)和凋亡的影響。
　　 方法:采用不同濃度LY294002處理胃癌AGS細(xì)胞，MTT法檢測(cè)AGS細(xì)胞經(jīng)LY294002作用后生存率的變化，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè).AGS細(xì)胞周期和凋亡的變化。
　　 結(jié)果:MTT結(jié)果顯示一定濃度的LY294002可抑制AGS細(xì)胞的生長(zhǎng)，并隨著濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)而明顯增強(qiáng)（P<0.05）。流式細(xì)胞術(shù)顯示AGS細(xì)

4、胞經(jīng)LY294002作用48h后，細(xì)胞周期阻滯于G1期，G1期細(xì)胞比例上升，S期細(xì)胞比例下降，AGS細(xì)胞有明顯凋亡，并呈現(xiàn)濃度依賴(lài)性（P<0.05）。
　　 結(jié)論:LY294002通過(guò)阻滯細(xì)胞周期及誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡抑制胃癌AGS細(xì)胞的生長(zhǎng)，且呈時(shí)間和劑量的依賴(lài)性。
　　 第三部分sCD40L聯(lián)合LY294002對(duì)胃癌AGS細(xì)胞生長(zhǎng)及侵襲轉(zhuǎn)移的影響
　　 目的:探討sCD40L聯(lián)合LY294002對(duì)胃癌AGS細(xì)胞體外生

5、長(zhǎng)及侵襲、轉(zhuǎn)移的影響，并初步探討其可能的作用機(jī)制。
　　 方法:MTT法檢測(cè)sCD40L（2ug/m1）、LY294002（20gmol/L）及兩者聯(lián)合應(yīng)用對(duì)AGS細(xì)胞生長(zhǎng)的影響；流式細(xì)胞術(shù)觀察AGS細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的變化；透射電鏡檢測(cè)AGS細(xì)胞形態(tài)變化；Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)分析AGS細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移能力的改變；免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)AGS細(xì)胞P13K、p-Akt、VEGF蛋白的表達(dá)。
　　

6、 結(jié)果:（1）MTT結(jié)果顯示，sCD40L和LY294002均能抑制胃癌AGS細(xì)胞生長(zhǎng)，兩者聯(lián)合作用后具有協(xié)同效應(yīng)（P<0.05）；（2）流式細(xì)胞術(shù)顯示，LY294002及sCD40L均可阻滯AGS細(xì)胞周期，兩者聯(lián)合作用細(xì)胞周期阻滯明顯增強(qiáng)（P<0.05），sCD40L對(duì)AGS細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響，LY294002可誘導(dǎo)AGS細(xì)胞凋亡，兩者聯(lián)合作用后細(xì)胞凋亡明顯增加（P<0.05）；（3）透射電鏡檢測(cè)顯示，對(duì)照組及sCD40L組AGS細(xì)

7、胞未出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變，而聯(lián)合用藥組的部分細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮，染色質(zhì)呈新月?tīng)钸吋鹊蛲鲂螒B(tài)學(xué)改變；（4）Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)顯示sCD40L及LN29400均可抑制AGS細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移，兩者聯(lián)合作用后對(duì)AGS細(xì)胞的侵襲、轉(zhuǎn)移抑制明顯增強(qiáng)（P<0.05）；（5）Western blot結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，sCD40L組AGS細(xì)胞PI3K、p-Akt蛋白表達(dá)明顯升高，LY294002組與聯(lián)合用藥組AGS細(xì)胞P13K、