LY294002對(duì)肺腺癌治療作用及機(jī)制的初步研究.pdf

1、[背景和目的]肺癌是世界上常見(jiàn)的惡性腫瘤，是目前對(duì)人類健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一，已成為絕大多數(shù)國(guó)家因癌癥死亡的首要原因。隨著手術(shù)和化療的進(jìn)展，肺癌的生存率有了一定的提高，但由于缺乏早期診斷方法，其預(yù)后仍然很差。另一方面，由于化療藥物的耐藥性和藥物副作用，也限制了它的應(yīng)用。因此有必要為肺癌治療開(kāi)辟新的治療途徑。近年來(lái)，隨著醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)和理論的進(jìn)展，針對(duì)肺癌發(fā)病的分子事件的靶向治療備受關(guān)注。針對(duì)腫瘤發(fā)展特異性生物環(huán)節(jié)的分子靶向

2、藥物治療，為肺癌治療開(kāi)辟了新途徑。近年的研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是體內(nèi)重要的細(xì)胞生存通路，在國(guó)外被視為癌細(xì)胞存活的首要通路。磷脂酰激醇3激酶(Phosphoinositide3-kinase，PI3K)是一種與細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的第二信使，其介導(dǎo)通路的激活可促進(jìn)細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡，在肺癌的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移過(guò)程中具有重要的作用，LY294002是PI3K的一種特異性的抑制劑，在抗腫瘤研究中有著良好的應(yīng)用前景。細(xì)胞實(shí)

3、驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PI3K抑制劑對(duì)白血病細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、食管癌細(xì)胞有抑制作用。本研究經(jīng)PI3K抑制劑LY294002作用于肺腺癌A549細(xì)胞，對(duì)PI3K/Akt在肺癌發(fā)病中的作用及PI3K/Akt抑制劑治療肺癌的機(jī)制進(jìn)行了探討，以期為肺癌的臨床治療提供新的理論依據(jù)。 [材料與方法]1.選用人肺癌細(xì)胞株A549為研究對(duì)象，用含10％胎牛血清的F12K培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)。 2.選用不同的LY294002濃度(5、10、20、40

4、μmol/L)干預(yù)24h、48h、72h，MTT法檢測(cè)490nm波長(zhǎng)處吸光度A。LY294002(20μmol/L)與順鉑(DDP)(0.5、1、2、4、8、16μg/ml)及紫杉醇(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8μg/ml)聯(lián)用干預(yù)A549細(xì)胞24h，MTT法檢測(cè)490nm波長(zhǎng)處吸光度A，計(jì)算對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率。 3.形態(tài)學(xué)觀察：MTT實(shí)驗(yàn)之前，以上各個(gè)實(shí)驗(yàn)組在倒置顯微鏡下觀察培養(yǎng)板內(nèi)細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況及形態(tài)學(xué)改變并且照

5、相。 4.LY294002(5、10、20、40μmol/L)、DDP(3μg/ml)、紫杉醇0.4μg/ml分別及LY294002(20μmol/L)與后二者聯(lián)用干預(yù)A549細(xì)胞24h，流式細(xì)胞術(shù)分析A549細(xì)胞細(xì)胞周期及凋亡率。 5.選用不同濃度的LY294002(5、10、20、40μmol/L)干預(yù)A549細(xì)胞24h后制作細(xì)胞爬片，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)SP法檢測(cè)Akt2、p-Akt、Bcl-2蛋白的表達(dá)情況。

6、 6.實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件處理。采用方差分析對(duì)多組間均數(shù)進(jìn)行比較，均數(shù)的兩兩比較用LSD法；率的比較及相關(guān)分析應(yīng)用卡方檢驗(yàn)及Spearman等級(jí)相關(guān)方法，以a=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。 [結(jié)果]1.LY294002對(duì)A549細(xì)胞增殖有抑制作用，隨著干預(yù)濃度的增加和作用時(shí)間的延長(zhǎng)，抑制率增加，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；LY294002干預(yù)A549細(xì)胞后，細(xì)胞凋亡率呈濃度依賴性增加(r=0.948

7、,P＜0.05)；LY294002可引起細(xì)胞周期變化，隨著干預(yù)濃度的增大，G0/G1期細(xì)胞增多，S期和G2/M期細(xì)胞減少。 2.LY294002與DDP及紫杉醇聯(lián)用對(duì)A549細(xì)胞的增殖有抑制作用。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：LY294002、DDP、紫杉醇以及LY294002與DDP及紫杉醇聯(lián)用均可引起A549細(xì)胞細(xì)胞周期發(fā)生變化，使細(xì)胞阻滯于G0/G1期，藥物聯(lián)用與藥物單獨(dú)作用相比，S期和G2/M期細(xì)胞減少，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

8、.05)。 3.倒置顯微鏡示：LY294002干預(yù)后細(xì)胞出現(xiàn)體積縮小，突起變少等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象。 4.LY294002可抑制A549細(xì)胞Akt2、p-Akt、Bcl-2蛋白的表達(dá)，與對(duì)照組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且均與LY294002干預(yù)濃度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。 [結(jié)論]1.LY294002可通過(guò)抑制PI3K/Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制A549細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)其凋亡、使細(xì)胞生長(zhǎng)阻滯于G0/G1期。PI3K/Akt信