PI3K-Akt通路及其抑制劑LY294002在肺癌發(fā)病機制及治療中的作用研究.pdf

1、授予單位代碼學號或申請?zhí)柮芗夃嵵荽髮W博士學位論文1045920032078論文題目：雕湫器麓躺勰在作者姓名：學科門類：專業(yè)名稱：導師姓名、職稱：王靜醫(yī)學病理學與病理生理學吳逸明教授二零零六年五月2006屆鄭州大學博士研究生畢業(yè)論文P13副Ah通路及其抑制劑1Y294002在肺癌發(fā)病機制及治療中的作用研究材料和方法1肺癌組織實驗實驗組為手術切除并經(jīng)病理證實的非小細胞肺癌標本80例，其中男53例，女27例。鱗癌44例，其中高分化鱗癌16例，

2、中分化鱗癌13例，低分化鱗癌15例；腺癌36例，其中高中分化腺癌20例，低分化腺癌16例。臨床分期：依據(jù)1997年國際抗癌聯(lián)盟(uICC)TNM分期標準，III期59例，IIIⅣ期21例(其中I期36例，II期23例，III期19例，Ⅳ期2例)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移36例。良性肺組織標本35例(支氣管擴張10例，肺結(jié)核18例，炎性假瘤7例)作為對照組。標本用10％福爾馬林溶液固定，石蠟包埋，制成厚舡m的切片，用蘇木素一伊紅(

3、HE)染色和免疫組織化學(sP法)檢測標本Akt2、pAkt蛋白的表達。2體外實驗21用含10％胎牛血清的F12K培養(yǎng)液常規(guī)培養(yǎng)人肺腺癌A549細胞。以濃度為(5、10、20、4嘰mol／L)的LY294002干預A549細胞24h，以免疫細胞化學法(SP法)及westernblot檢測A549細胞Akt2、pAkl、vEGF、MMP9及Bcl2蛋白的表達。22培養(yǎng)人肺腺癌A549細胞，LY294002(5、10、20、4吮mol／L)

4、干預24h，48h、72h，LY294002與順鉑(DDP)及n7294002與紫杉醇聯(lián)用干預A549細胞24h，MTT法檢測490nm波長處吸光度爿，計算對細胞生長的抑制率。23LY294002(5、10、20、4毗mol／L)干預24h，DDP(3肛∥m1)、紫杉醇(O銣g／m1)及LY294002(2q“mol／L)與后2者聯(lián)用干預A549細胞24h，電鏡觀察細胞干預前后的變化；流式細胞術分析A549細胞細胞周期及凋亡率。3體內(nèi)實

5、驗3136只裸鼠，于A549細胞接種1周腫瘤長出后，隨機分為6組。LY294002(L，Y29400225mg／kg，腹腔注射)；DDP組(DDP4mg／蠔，腹腔注射)：紫杉醇組(紫杉醇20Illg／kg，腹腔注射)；LY294002DDP組(LⅣ29400225mg／塢DDP4lIlg／蠔，腹腔注射)，I_Y294002紫杉醇組(L一29400225mg／塢紫杉醇20mg／kg腹腔注射)，對照組用等容量生理鹽水腹腔注射。以上藥物LY2