肥大細(xì)胞與眼眶特發(fā)性炎性假瘤纖維化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第1部分肥大細(xì)胞與眼眶特發(fā)性炎性假瘤纖維化的相關(guān)性研究.材料與方法.1.標(biāo)本來(lái)源收集該院2000年9月至2002年6月經(jīng)住院手術(shù)病理確診為特發(fā)性眼眶炎性假瘤的53例患者的病理組織石蠟標(biāo)本,參照Henderson分類法,根據(jù)病理組織中淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)與纖維化的不同程度,將眼眶炎性假瘤分為3型,即彌漫性淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)型、混合型和纖維硬化型.其中,淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)型19例;纖維硬化型22例;混合型12例;以4例正常人眼眶組織標(biāo)本作為正常對(duì)照.所有患者均

2、無(wú)其他眼疾.2.方法:應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)SABC法對(duì)53例特發(fā)性眼眶炎性假瘤組織標(biāo)本及4例正常眼眶組織標(biāo)本進(jìn)行肥大細(xì)胞特異性標(biāo)記物類胰蛋白酶單克隆抗體檢測(cè),觀察肥大細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量、分布特點(diǎn)、與膠原纖維的關(guān)系以及與IOIP組織纖維化程度的相關(guān)性.結(jié)論:1.與正常組織標(biāo)本比較,IOIP組織標(biāo)本中肥大細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量顯著增加;肥大細(xì)胞的分布特點(diǎn)提示肥大細(xì)胞參與了IOIP組織纖維化的病理過(guò)程.2.肥大細(xì)胞浸潤(rùn)的數(shù)量與IOIP組織標(biāo)本中的纖維化程度

3、呈高度正相關(guān),肥大細(xì)胞可能對(duì)眼眶特發(fā)性炎性假瘤纖維化的發(fā)生、發(fā)展有重要的促進(jìn)作用.第2部分體外培養(yǎng)小鼠骨髓源性肥大細(xì)胞與眼眶成纖維細(xì)胞共育的實(shí)驗(yàn)研究.1.材料與方法.體外分離培養(yǎng)BALB/c小鼠骨髓源性肥大細(xì)胞BMMC和同源鼠眼眶成纖維細(xì)胞OFB,并進(jìn)行純化和鑒定.將兩種細(xì)胞共育,共育分為2組:兩種細(xì)胞接觸共育組和非接觸共育組,對(duì)照分為2組:BMMC對(duì)照組和OFB對(duì)照組;應(yīng)用光鏡、電鏡、特殊染色、細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)及RT-PCR等方法觀察共育

4、前后兩種細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化、超微結(jié)構(gòu)改變、眼眶成纖維細(xì)胞的增殖情況以及4個(gè)目的基因(mSCF、C-kit、bFGF和ProcollagenI)在共育前后的表達(dá)差異情況.結(jié)論:1.肥大細(xì)胞對(duì)眼眶成纖維細(xì)胞的生存和增殖有顯著的促進(jìn)作用,并使其功能活躍,這種作用主要是通過(guò)兩種細(xì)胞間的直接緊密接觸而實(shí)現(xiàn)的.表明肥大細(xì)胞與眼眶成纖維細(xì)胞之間的相互作用有其獨(dú)特的機(jī)制,詳細(xì)機(jī)制有待進(jìn)一步研究.2.肥大細(xì)胞與眼眶成纖維細(xì)胞通過(guò)直接接觸共育能夠顯著上調(diào)SC

5、F、C-kit、bFGF和ProcollagenI的表達(dá)水平,提示這兩種細(xì)胞通過(guò)相互接觸作用刺激纖維化因子的表達(dá)增強(qiáng)而參與纖維化的進(jìn)程.第3部分反義SCF抑制成纖維細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究.1.材料與方法.構(gòu)建正義及反義SCF表達(dá)質(zhì)粒載體,分別轉(zhuǎn)染小鼠胚胎成纖維細(xì)(3T3細(xì)胞);應(yīng)用光鏡、電鏡、特殊染色、細(xì)胞生長(zhǎng)計(jì)數(shù)等方法觀察兩種細(xì)胞培養(yǎng)5天后實(shí)驗(yàn)各組中BMMC和3T3的增殖情況;應(yīng)用雙抗體夾心ELISA方法在蛋白水平觀察實(shí)驗(yàn)各組中4個(gè)目的因

6、子SCF、CD117(C-kit的蛋白產(chǎn)物)、bFGF和Collagenl(ProcollagenI的蛋白產(chǎn)物)的表達(dá)情況.實(shí)驗(yàn)分為5組:正義SCF轉(zhuǎn)染共育組、反義SCF轉(zhuǎn)染共育組、未轉(zhuǎn)染共育組、BMMC對(duì)照組和3T3對(duì)照組.結(jié)論:1.在體外實(shí)驗(yàn)中,反義SCF轉(zhuǎn)染小鼠成纖維細(xì)胞后,可以有效抑制肥大細(xì)胞與成纖維細(xì)胞之間的相互促進(jìn)增殖作用,兩種細(xì)胞的生存和增殖都顯著下降.2.在體外肥大細(xì)胞與成纖維細(xì)胞接觸共育體系中,反義SCF轉(zhuǎn)染小鼠成纖維