輔助性T淋巴細胞與特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化關(guān)系的初步研究.pdf

1、特發(fā)性肺間質(zhì)纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)迄今為止病因和發(fā)病機制不明確,但各種原因損傷后的異常修復(fù)在IPF發(fā)病機制中被認為具有決定性作用,而在損傷修復(fù)過程中,炎癥反應(yīng)占有一定地位。Th細胞是參與炎癥反應(yīng)的細胞成分,既往認為Th1/Th2平衡失調(diào)在肺纖維化的進程中具有重要的作用。自Treg細胞和Th17細胞被發(fā)現(xiàn)以來,Th17、Treg細胞被認為可能與Th1/Th2細胞一樣參與了IPF的發(fā)生和

2、發(fā)展。鑒于Th1、Th2、Th17細胞以及Treg細胞均為CD4+T細胞,而且它們之間相互作用,相互抑制,形成一個非常復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),因此Th細胞亞群在IPF中的作用有必要進一步研究。
　　 [目的]
　　 本研究擬探討輔助性T細胞亞群在IPF患者外周血和支氣管肺泡灌洗液中的分布、Th亞群各自的特異性轉(zhuǎn)錄因子在外周血中的表達狀況、以及各亞群對PHA或rIL-2刺激的反應(yīng),初步探討Th細胞在IPF的作用及其意義。
　　

3、 [方法]
　　 收集IPF患者及對照組空腹外周靜脈血及肺泡灌洗液；對外周血、肺泡灌洗液淋巴細胞進行刺激、培養(yǎng)以及胞內(nèi)外標記,應(yīng)用流式細胞儀(FCM)檢測Th1、Th2、Th17以及Treg細胞比例,分析Th細胞亞群與IPF的關(guān)系；應(yīng)用RT-PCR.測定Th細胞亞群各特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達；分離外周血血漿,應(yīng)用ELISA法檢測不同Th細胞亞群相關(guān)細胞因子濃度；同時對PBMC、CD4+CD25T以及Treg細胞在不同培養(yǎng)基(自體血漿

4、培養(yǎng)基vs胎牛血清培養(yǎng)基)中分別進行培養(yǎng),應(yīng)用PHA或rIL-2刺激后測定培養(yǎng)上清液中相關(guān)細胞因子濃度,進一步評價Th細胞在IPF中的功能狀況。各組實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(x±s)表示；應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。對呈正態(tài)分布、方差齊的數(shù)據(jù),兩組間比較采用獨立樣本t檢驗,相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)檢驗；非正態(tài)分布、方差不齊的數(shù)據(jù),兩組間比較采用Mann-whitney U檢驗,相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)檢驗；P<0.

5、05差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 [結(jié)果]
　　 1.在外周血中與對照組相比,IPF組Th1、Treg細胞的比例降低(p值分別為0.009、0.001)；Th17細胞的比例升高(p=0.004),而Th2細胞的比例,兩組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.075)；
　　 2.外周血Treg細胞的比例與肺功能參數(shù)(FVC、TLC、DLCO)呈正相關(guān)；
　　 3.在肺泡灌洗液中與對照組相比,IPF患者Treg細胞的比例降

6、低(p=0.019)；其余Th細胞亞群之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義；
　　 4.與對照組相比,IPF組PBMC中T-bet、FOXP3的表達明顯降低(p值均小于0.001)；RORc的表達IPF組升高,但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.09)；GATA-3的表達兩組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.898)；PBMC中T-bet、GATA-3、FOXP3的表達與外周血中相應(yīng)的細胞亞群的比例一致；T-bet的表達與Th1細胞比例呈正相關(guān)、FOX

7、P3的表達與Treg細胞比例呈正相關(guān)；
　　 5.與對照組相比,IPF組血漿中IFN-γ和IL-10的濃度降低(p值分別為0.010、0.001),IL-17A的濃度升高(p=0.011)；但IPF組血漿IL-4的濃度與對照組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.090)；
　　 6.對PBMC、CD4+CD25-T細胞在不同培養(yǎng)基的培養(yǎng)中,應(yīng)用PHA刺激后胎牛血清培養(yǎng)基中IFN-γ或IL-17A的濃度均較自體血漿培養(yǎng)基明顯升

8、高,而IL-4的濃度雖有升高,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 7.應(yīng)用rIL-2刺激后,與對照組比較,IPF組的Treg細胞分泌IL—10的能力明顯降低(p<0.001)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.Th細胞在IPF發(fā)病中可能具有重要地位,Th1細胞及其分泌的IFN-γ、Treg細胞及其分泌的IL-10可能對IPF有保護作用；Th2細胞及其分泌的IL-4在肺纖維化中的作用有待進一步研究；Th17細胞及IL-17A可能

9、參與了IPF的發(fā)??；
　　 2.與對照組相比,IPF組PBMC中T-bet、FOXP3的表達明顯下降是決定Th1、Treg細胞在IPF中比例降低的主要因素；在IPF組RORc的表達升高可能部分決定了Th17在IPF中的分化；
　　 3.在外周血中與對照組相比,IPF組Th1、Th2及Th17細胞本身的分泌功能沒有明顯差別；血漿中IFN-γ、IL-4以及IL-17A濃度在兩組中的差異可能主要與血漿中抑制因素的強弱有關(guān)。