MicroRNA-21參與上皮性卵巢癌的化療耐藥及其作用機(jī)制.pdf

1、第一部分上皮性卵巢癌患者血清 microRNA-21的水平及其臨床意義研究
　　目的：檢測上皮性卵巢癌化療耐藥及化療敏感患者血清中microRNA-21的表達(dá)，并探討其評估上皮性卵巢癌化療耐藥及預(yù)后的可行性。
　　方法：采用探針型real-time PCR技術(shù)檢測和比較20例上皮性卵巢癌患者和10例正常人血清標(biāo)本中microRNA-21的表達(dá)，并分析血清 microRNA-21水平與上皮性卵巢癌患者化療耐藥及其臨床病理特征的

2、相關(guān)性。
　　結(jié)果：正常人、上皮性卵巢癌化療敏感和化療耐藥患者血清中microRNA-21的相對表達(dá)量分別為0.573±0.318、2.606±1.057、26.766±26.710，上皮性卵巢癌化療敏感和化療耐藥患者血清中miR-21的相對表達(dá)量均顯著高于正常人血清中miR-21的相對表達(dá)量(P<0.05)，而上皮性卵巢癌化療耐藥患者血清中miR-21表達(dá)顯著高于上皮性卵巢癌化療敏感患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)?；熌?/p>

3、藥患者血清miR-21表達(dá)水平與其手術(shù)-病理分期無明顯差異（P>0.05），化療耐藥患者血清miR-21的表達(dá)水平與是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無明顯相關(guān)性（P>0.05）。
　　結(jié)論：上皮性卵巢癌化療耐藥患者血清 microRNA-21水平顯著升高，提示其可能是上皮性卵巢癌化療耐藥的潛在腫瘤標(biāo)志之一。
　　第二部分MicroRNA-21通過負(fù)性調(diào)節(jié)PTEN參與上皮性卵巢癌的順鉑耐藥
　　目的:通過檢測卵巢癌細(xì)胞株SKOV3/D

4、DP與SKOV3中miR-21的差異性表達(dá)，探討miR-21在與上皮性卵巢癌的順鉑耐藥關(guān)系。并進(jìn)一步檢測PTEN在mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)，探討miRNA-21促進(jìn)上皮性卵巢癌順鉑耐藥的可能作用機(jī)制。
　　方法：（1）MTT法檢測SKOV3/DDP相對于其敏感細(xì)胞株對順鉑的耐藥性和耐藥指數(shù)；（2）采用real-time PCR技術(shù)檢測miRNA-21和PTEN mRNA在SKOV3及SKOV3/DDP中的差異性表達(dá)；（3）we

5、stern blot檢測PTEN蛋白在SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)；（4）SKOV3細(xì)胞株和SKOV3/DDP細(xì)胞株分別用脂質(zhì)體2000轉(zhuǎn)染miR-21 mimics及inhibitors。并分別設(shè)置陰性對照組。轉(zhuǎn)染后，MTT法檢測SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞的耐藥性。real time PCR測定SKOV3及SKOV3/DDP中miR-21和PTEN mRNA的表達(dá)量。western blot的方法檢測PTEN蛋白

6、在卵巢癌敏感及耐藥細(xì)胞株中的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）順鉑對SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞的 IC50值分別為5.351μ mol/L和22.488μ mol/L，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），耐藥指數(shù)為4.2倍。（2）從 SKOV3及 SKOV3/DDP中提取總 RNA，real-time PCR的檢測證實(shí) miR-21在SKOV3/DDP中的相對表達(dá)量顯著高于其在 SKOV3細(xì)胞中的表達(dá)。而 PTEN mRNA在

7、SKOV3及SKOV3/DDP細(xì)胞中的表達(dá)無明顯差異（P>0.05）（3）western blot檢測發(fā)現(xiàn)PTEN蛋白在SKOV3細(xì)胞中表達(dá)量高于其在SKOV3/DDP細(xì)胞的表達(dá)（4）real-time PCR檢測證實(shí)SKOV3+mimics細(xì)胞中miRNA-21的相對表達(dá)量較陰性對照組升高了344倍，而SKOV3/DDP+inhibitor細(xì)胞中miRNA-21相對表達(dá)量約為陰性對照組的0.109倍，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)

8、。（5）real-time PCR檢測證實(shí) SKOV3+mimics細(xì)胞中PTEN mRNA的相對表達(dá)量較陰性對照組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。而SKOV3/DDP+inhibitor細(xì)胞中PTEN mRNA的相對表達(dá)量與陰性對照組PTEN mRNA的相對表達(dá)量無明顯差異（P>0.05）。PTEN mRNA在 SKOV3+nc組和SKOV3/DDP+nc組的相對表達(dá)量亦無明顯差異（P>0.05）。（7）轉(zhuǎn)染后，順鉑對SK

9、OV3+nc和SKOV3+mimics細(xì)胞的 IC50值分別為5.205μ mol/L和25.763μ mol/L，SKOV3+mimics細(xì)胞較陰性對照組耐藥倍數(shù)升高約4.9倍。順鉑對SKOV3/DDP+nc和SKOV3/DDP+inhibitor細(xì)胞的IC50值分別為21.914μ mol/L和15.524μ mol/L，SKOV3/DDP+inhibitor細(xì)胞耐藥倍數(shù)約為陰性對照組的0.7倍。（8）轉(zhuǎn)染后，Western blo