利福平和異煙肼的肝臟毒性作用及部分機(jī)理.pdf

1、背景和目的：異煙肼和利福平均是WHO推薦的臨床抗結(jié)核治療一線藥物，也是我國急性藥物性肝損傷的重要病因。異煙肼和利福平聯(lián)合或單獨使用均具有肝臟毒性，長期服用異煙肼和利福平導(dǎo)致藥物性肝損傷，但異煙肼和利福平之間的相互作用尚未闡明。異煙肼肝臟毒性與其經(jīng)CYP 2E1代謝后致氧化應(yīng)激有關(guān)，饑餓誘導(dǎo)CYP 2E1表達(dá)，但饑餓是否加重異煙肼肝臟毒性尚不清楚。利福平和異煙肼聯(lián)合使用顯著升高大鼠肝臟甘油三酯和膽固醇水平，利福平或異煙肼單獨使用對肝臟脂質(zhì)

2、代謝的影響需進(jìn)一步研究。本課題通過研究 (1) 饑餓狀態(tài)對異煙肼肝臟毒性的影響，(2) 利福平單獨給藥對肝臟脂質(zhì)代謝的影響，(3) 利福平聯(lián)合使用對異煙肼肝臟毒性作用的影響，進(jìn)一步闡明兩種一線抗結(jié)核藥物的肝臟毒作用機(jī)理，為臨床合理用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法：本研究由三部分組成。(1) 為研究異煙肼單獨對小鼠肝臟的損傷效應(yīng)，將雌性ICR成年健康小鼠隨機(jī)分為對照組和異煙肼組，分別灌胃給予等容積的生理鹽水和異煙肼(100 mg/k

3、g)，連續(xù)處理1W。所有小鼠在末次異煙肼處理后均禁食6h處死和取材；為研究短期饑餓對異煙肼引起小鼠肝臟氧化應(yīng)激的影響及其作用機(jī)理，將雌性ICR成年健康小鼠隨機(jī)分為四組：對照組、異煙肼組、饑餓組及饑餓+異煙肼組。對照組和異煙肼組分別灌胃給予等容積的生理鹽水或異煙肼(100 mg/kg)；饑餓組及饑餓+異煙肼組小鼠每天在給予生理鹽水或異煙肼前12 h及后6 h均禁食；所有小鼠均連續(xù)處理4 d，在末次異煙肼處理后均禁食6h處死和取材。用臨床全

4、自動生化分析儀檢測肝生化指標(biāo)(ALT、AST、AKP)，用HE染色法觀察肝臟組織病理改變，用Griffith法測定肝臟組織還原型GSH含量，用TBARS法測定肝臟組織MDA含量，采用RT-PCR和Western blotting技術(shù)分別檢測肝組織cyp2e1 mRNA和蛋白表達(dá)。(2)為研究多次單獨給予利福平對肝臟脂質(zhì)代謝的影響，將雌性ICR成年健康小鼠隨機(jī)分為對照組和利福平組，分別灌胃給予等容積的生理鹽水或利福平(200 mg/kg)

5、，連續(xù)處理1W；為研究單次單獨給予利福平對肝臟脂質(zhì)代謝的影響，經(jīng)口灌胃給予單劑量利福平(200 mg/kg)，給藥后不同時點(2h，6h或24h)取材；用臨床全自動生化分析儀檢測所有小鼠血清肝生化指標(biāo)(ALT、AST、AKP、TBIL和TBA)及血清與肝臟脂質(zhì)代謝相關(guān)的生化指標(biāo)(TCH、TG、HDL、VLDL)；用HE染色法和油紅O染色法分別觀察利福平處理小鼠肝臟組織病理改變和小鼠肝臟脂質(zhì)聚集的變化；用RT-PCR技術(shù)檢測肝臟脂肪酸合成

6、酶(Fasn)、乙酰輔酶A羧化酶(Acc)、硬脂酰輔酶A去飽和酶1(Scd-1)和清道夫受體(CD36) mRNA水平。(3) 為研究利福平對異煙肼引起肝臟發(fā)生氧化應(yīng)激的影響及其機(jī)理，將雌性ICR成年健康小鼠隨機(jī)分為對照組、利福平組、異煙肼組及異煙肼+利福平組四個組，分別灌胃給予利福平(200mg/kg)或/和異煙肼(100mg/kg)，對照組給予等容量的溶劑，連續(xù)處理1 W。所有小鼠在末次給藥后均禁食6 h取材。用HE染色法觀察肝臟組

7、織病理改變，用Griffith法測定肝臟組織GSH 含量，用TBARS法測定肝臟組織MDA含量，采用RT-PCR和Western blotting技術(shù)分別檢測肝組織cyp2e1 mRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：(1)異煙肼處理小鼠1W或4d后血清ALT和AST輕度升高，小鼠肝臟組織HE染色顯示肝細(xì)胞出現(xiàn)輕度壞死和炎癥。與對照組小鼠相比，短期饑餓或異煙肼單獨處理均能顯著降低小鼠肝臟 GSH含量并明顯升高肝臟脂質(zhì)過氧化水平；與

8、異煙肼組小鼠相比，短期饑餓顯著降低異煙肼引起的小鼠肝臟GSH消耗并明顯升高異煙肼引起的脂質(zhì)過氧化水平；短期饑餓或異煙肼分別處理均顯著上調(diào)小鼠肝臟CYP 2E1蛋白表達(dá)水平，且短期饑餓進(jìn)一步增強(qiáng)異煙肼對小鼠肝臟CYP 2E1蛋白表達(dá)的上調(diào)作用。(2)利福平1W和單次處理的小鼠血清ALT水平輕度升高，TBA和TBIL水平均顯著升高，肝臟出現(xiàn)明顯的脂質(zhì)聚集和脂肪變性現(xiàn)象，利福平連續(xù)1W處理顯著升高肝臟脂質(zhì)代謝產(chǎn)物TCH、TG、HDL和VLDL

9、水平，單次處理后6h明顯升高小鼠肝臟脂質(zhì)代謝產(chǎn)物TG、VLDL水平；利福平連續(xù)1W處理明顯上調(diào)小鼠肝臟Fasn和CD36的mRNA水平，單次處理后6h明顯上調(diào)Fasn、Acc和CD36的mRNA水平。(3) 異煙肼顯著升高小鼠肝臟組織脂質(zhì)過氧化水平并降低GSH含量，利福平顯著減弱異煙肼引起的氧化應(yīng)激效應(yīng)；異煙肼顯著誘導(dǎo)肝臟組織CYP 2E1蛋白表達(dá)水平，利福平顯著抑制肝臟組織CYP 2E1蛋白表達(dá)水平；與單純異煙肼處理相比，利福平顯著減