大蒜油對(duì)利福平及異煙肼所致肝臟毒性保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的
　　近年來(lái)由于結(jié)核疫情反彈及耐多藥結(jié)核菌和多耐藥結(jié)核菌的出現(xiàn)，導(dǎo)致結(jié)核防治情況愈加復(fù)雜，結(jié)核治療療程及用藥等增加，結(jié)核藥物導(dǎo)致的肝臟損傷的發(fā)生率也逐年上升，成為藥物性肝損傷最常見(jiàn)的原因之一，特別是異煙肼(INH)、利福平(RIF)所致的肝損傷居前兩位。雖然關(guān)于利福平、異煙肼等抗結(jié)核藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生肝臟毒性的研究很多，但是這些抗結(jié)核藥物的損傷機(jī)制并沒(méi)有得到完全的闡述，目前較多的損傷機(jī)制研究集中在氧化抗氧化機(jī)制，研究發(fā)現(xiàn)該肝臟毒

2、性的產(chǎn)生可能與體內(nèi)氧化抗氧化水平失衡有關(guān)。
　　大蒜油具有廣泛的藥理作用，于數(shù)千年前就開(kāi)始廣泛應(yīng)用于食藥領(lǐng)域。比如大蒜油有明顯的殺菌消炎作用，特別是近幾年有不少研究發(fā)現(xiàn)大蒜的油狀提取物對(duì)多種結(jié)核桿菌，特別是多耐藥性結(jié)核桿菌、耐多藥結(jié)核桿菌以及一些非抗藥結(jié)核桿菌可以起到很明顯的抑制作用。大蒜油含有很多抗氧化活性的有效成分，它能明顯預(yù)防由于外源物質(zhì)如常見(jiàn)藥物如對(duì)乙酰氨基酚等誘導(dǎo)產(chǎn)生的急性肝臟損傷，但是大蒜油對(duì)利福平和異煙肼所致肝臟損傷

3、是否有保護(hù)作用國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　本次研究參考相關(guān)文獻(xiàn)，采用RIF和1NH混合灌胃制備結(jié)核藥物肝損傷的動(dòng)物模型，通過(guò)檢測(cè)血清中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)和總膽紅素(TB)等指標(biāo)以及觀察肝臟組織病理學(xué)切片，證實(shí)大蒜油是否具有預(yù)防RIF和INH引起的藥物肝損傷的作用，并從機(jī)體氧化抗氧化系統(tǒng)等方面探討大蒜油預(yù)防結(jié)核藥物肝損傷的機(jī)理，為以后進(jìn)一步研究及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　

4、　研究方法
　　1.動(dòng)物模型建立
　　健康雄性Wistar大鼠SPF級(jí)，180-200g，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后，隨機(jī)分為5組:大蒜油低、中、高劑量處理組、RIF+INH模型組、正常對(duì)照組，每組12只。
　　首先大蒜油處理組同時(shí)灌胃給予相應(yīng)濃度的大蒜油(20、40和80mg/kg)，正常對(duì)照組灌胃給予等體積的玉米油，2h后RIF+INH模型組和大蒜油處理組均灌胃給予RIF(150mg/kg)+INH(100mg/kg)，對(duì)照

5、組灌胃給予等體積的5％淀粉溶液。連續(xù)灌胃28天后處死大鼠，并將血清及剩余肝臟凍存。
　　2.大蒜油預(yù)防結(jié)核藥物肝損傷的效果評(píng)價(jià)
　　計(jì)算肝臟系數(shù);測(cè)定血清中ALT、AST、ALP及TB的活性或含量;制備肝臟病理切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，觀察肝損傷情況。
　　3.大蒜油對(duì)機(jī)體氧化抗氧化系統(tǒng)的影響
　　測(cè)定肝臟勻漿及血清中超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)、過(guò)氧化氫酶(catala

6、se，CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathioneperoxidase，GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(glutathionereductase，GR)、谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferase，GST)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)、谷胱甘肽(glutathione，GSH)、總抗氧化能力(TotalAntioxidantCapacity，T-AOC)。
　　4.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理<

7、br>　　用IBMSPSSStatistics20統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用One-wayANOVA，并進(jìn)行兩兩比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　研究結(jié)果
　　1.血清中ALT、AST、ALP及TB的變化
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠血清中ALT、AST及ALP的活性明顯升高(P＜0.05或P＜0.01)，TB的含量明顯升高（P＜0.01）;與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組血清中ALT、A

8、ST、ALP的活性明顯降低(P＜0.05或P＜0.01)，TB的含量降低。
　　2.血清及肝臟組織中MDA的變化
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟組織中MDA水平明顯升高（P＜0.05）;與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清中MDA水平分別降低了2.91％、9.30％(P＞0.05)，20.35％(P＜0.05)，肝臟組織中MDA水平明顯降低（P＜0.05）。
　　3.血清及肝臟組織中GS

9、H的變化
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠的血清及肝臟組織勻漿中GSH水平明顯降低（P＜0.05）;與模型組大鼠相比，大蒜油高劑量處理組大鼠血清中GSH水平明顯升高（P＜0.05），肝臟組織中GSH水平也明顯升高了27.56％(P＜0.05)。
　　4.血清及肝臟組織中GST、GSH-Px和GR的變化
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠的血清GST水平降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組大鼠肝臟勻漿中GST水平明顯降

10、低(P＜0.05);與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清中GST水平升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，大蒜油中、高劑量處理組大鼠肝臟組織中GST水平明顯升高（P＜0.05）。
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟組織勻漿中GSH-Px水平明顯降低;與模型組大鼠相比，大蒜油中、高劑量處理組大鼠血清中GSH-Px水平明顯升高(P＜0.05)，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟組織中GSH-Px水平明顯升高(P＜0.0

11、5)。
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟組織勻漿中GR水平?jīng)]有明顯改變，與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清GR水平有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟勻漿組織中GR水平分別升高10.81％、18.92％、29.73％(P＜0.05)。
　　5.血清及肝臟組織中SOD和CAT的變化
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟組織勻漿中SOD水平明顯降低，與模

12、型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清SOD水平明顯升高（P＜0.05），并且大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟組織勻漿中SOD水平也明顯升高（P＜0.05）。
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組大鼠血清及肝臟勻漿組織中CAT水平明顯降低(P＜0.05)，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清中CAT水平分別降低23.96％、19.26％、10.75％，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟勻漿中CAT水平明顯

13、下降（P＜0.05）;與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠血清中CAT水平分別升高4.13％、10.59％、22.22％，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，大蒜油低、中、高劑量組大鼠肝臟組織中CAT水平明顯升高（P＜0.05）。
　　6.血清及肝臟組織T-AOC的變化
　　與正常對(duì)照組大鼠相比，模型組、大蒜油低劑量處理組大鼠血清及肝臟勻漿中T-AOC水平明顯降低（P＜0.05）;與模型組大鼠相比，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠

14、血清T-AOC水平有所升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，大蒜油低、中、高劑量處理組大鼠肝臟勻漿中T-AOC水平分別升高1.52％(P＞0.05)、15.15％（P＜0.05）、22.22％(P＜0.05)。
　　7.肝臟形態(tài)學(xué)的變化
　　肝臟石蠟切片HE染色結(jié)果顯示模型組肝臟發(fā)生輕微損傷，表現(xiàn)在肝細(xì)胞濁腫，中央靜脈周圍部分肝臟細(xì)胞出現(xiàn)氣球樣變。大蒜油各處理組病理?yè)p傷明顯改善，與正常對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論: