2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩125頁未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分 MicroRNA-21-5p靶向調(diào)控絲裂原活化蛋白激酶激酶3
  目的
  驗(yàn)證MicroRNA-21-5p(miR-21-5p)與絲裂原活化蛋白激酶激酶3(MKK3)3’非編碼區(qū)(3’UTR)結(jié)合,證實(shí)miR-21-5p與MKK3的靶向調(diào)控關(guān)系。
  方法
  1、分別構(gòu)建MKK33’UTR報(bào)告載體(MKK3-3U)及MKK33’UTR突變報(bào)告載體(MKK3-3U-M);化學(xué)合成miR-21-5p模擬

2、物(mimics)、miR-21-5p抑制劑(inhibitor)及無意義miR(NC)。
  2、分別用NC(NC1組)、mimics(mimic1組)、inhibitor(inhibitor1組)與MKK3-3U共轉(zhuǎn)染人胚腎(HEK293)細(xì)胞,雙熒光素酶檢測(cè)儀檢測(cè)細(xì)胞熒光比值。
  3、分別用空載質(zhì)粒(pYr-MirTarge)(對(duì)照組)、MKK3-3U(Wt組)、MKK3-3U-M(Mut組)與mimics共轉(zhuǎn)染HE

3、K293,雙熒光素酶檢測(cè)儀檢測(cè)細(xì)胞熒光比值。
  4、NC(NC2組)、mimics(mimic2組)、inhibitor(inhibitor2組)分別干預(yù)人腎小管上皮(HK-2)細(xì)胞;采用反轉(zhuǎn)錄PCR、Western blot方法檢測(cè)各組HK-2細(xì)胞中MKK3的mRNA及蛋白表達(dá)水平。
  結(jié)果
  1、NC1組、mimic1組、inhibitor1組熒光比值分別為100%、67.99%、133.17%。mimic1

4、組與NC1組比較,差異有顯著性(P<0.01)。證實(shí)了miR-21-5p能與MKK33’UTR靶向結(jié)合。
  2、對(duì)照組、Wt組、Mut組熒光比值分別為100%、65.3%、98.48%,Wt組與對(duì)照組比較,差異有顯著性(P<0.01),而Mut組、對(duì)照組間熒光比值差異無顯著性(P>0.05)。證實(shí)了miR-21-5p不能與突變的MKK33’UTR結(jié)合。
  3、NC2組、mimic2組、inhibitor2組,MKK3 m

5、RNA相對(duì)表達(dá)量為1.36±0.02、1.01±0.04、1.43±0.06(P<0.01);蛋白質(zhì)相對(duì)表達(dá)量為0.97±0.05,0.62±0.06、1.36±0.32(P<0.01);mimic2組、NC2組間MKK3的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平均明顯降低(P<0.05)。證實(shí)miR-21-5p在mRNA及蛋白水平低調(diào)MKK3。
  結(jié)論
  MKK3是miR-21-5p的靶基因,miR-21-5p在mRNA和蛋白質(zhì)水平調(diào)

6、控MKK3表達(dá),提示miR-21-5p可能是調(diào)控p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信號(hào)通路的重要分子。
  第二部分缺血再灌注腎損傷模型小鼠腎臟miR-21/絲裂原活化蛋白激酶激酶3/白介素-6及腫瘤壞死因子-α的表達(dá)及意義
  目的
  探討缺血再灌注腎損傷模型小鼠腎臟miR-21、MKK3及下游白介素-6(IL-6)/腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá)及意義。
  方法
  1、實(shí)驗(yàn)分組:將

7、雄性57BL/6J小鼠隨機(jī)分為3大組:對(duì)照組(C組)、假手術(shù)組(S組)、缺血再灌注組(IR組),除C組外,其余兩組根據(jù)再灌注時(shí)間點(diǎn)分別分為9個(gè)亞組,即再灌注后0h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d;
  2、動(dòng)物模型:采用夾閉雙側(cè)腎蒂30min后再灌注的方法,建立缺血再灌注腎損傷模型;假手術(shù)組只暴露雙側(cè)腎蒂,不進(jìn)行夾閉。
  3、實(shí)驗(yàn)方法:全自動(dòng)生化檢測(cè)儀檢測(cè)各組小鼠血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水

8、平;HE染色觀察腎臟病理損害,腎小管間質(zhì)病理損害評(píng)分法計(jì)量小鼠腎臟病理損害程度;實(shí)時(shí)定量RT-PCR法檢測(cè)腎組織miR-21表達(dá)水平;RT-PCR、免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)腎組織MKK3、IL-6、TNF-α表達(dá)。
  結(jié)果
  1、腎功能變化及腎臟病理評(píng)分:IR組缺血再灌注后Scr、BUN、腎臟病理損害及腎小管間質(zhì)病理評(píng)分逐漸加重,24h達(dá)到最高峰,之后逐漸下降,各個(gè)時(shí)間點(diǎn)亞組差異具有顯著性(P<0.01)。
  2

9、、腎臟miR-21的表達(dá)變化:IR組再灌注后腎臟miR-21表達(dá)水平逐漸上升,12h至24h上升最快,24h達(dá)峰值,為基線值的286.0倍,并穩(wěn)定維持在此高水平。
  3、MKK3表達(dá)變化:IR組小鼠腎組織MKK3 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平在再灌注后逐漸上升,24h達(dá)到最高值,之后逐漸下降。
  4、腎臟IL-6、TNF-α表達(dá)變化:IR組小鼠腎臟IL-6 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平在缺血再灌注后急劇上升,再灌注6h達(dá)到高峰,

10、然后逐漸下降。IR組小鼠腎臟缺血再灌注后TNF-α mRNA表達(dá)水平逐漸上升,于再灌注后24h達(dá)峰值;與mRNA的表達(dá)趨勢(shì)不同的是:IR組缺血再灌注后TNF-α蛋白表達(dá)逐漸上升,再灌注48h達(dá)到高峰,48h至72h保持高值,之后逐漸下降。
  結(jié)論
  MiR-21及絲裂原活化蛋白通路及下游炎癥因子—白介素-6/腫瘤壞死因子-α與缺血再灌注腎損傷密切相關(guān),miR-21及MKK3及下游因子—IL-6/TNF-α在缺血再灌注腎臟

11、損傷過程中起著重要作用。
  第三部分腎臟缺血預(yù)處理上調(diào)miR-21低調(diào)絲裂原活化蛋白激酶激酶3及下游白介素-6/腫瘤壞死因子-α保護(hù)腎臟
  目的
  探討miR-21介導(dǎo)絲裂原活化蛋白激酶激酶3低調(diào)白介素6/腫瘤壞死因子-α對(duì)腎臟的保護(hù)作用。
  方法
  1、實(shí)驗(yàn)分組:將雄性 C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為3大組:缺血再灌注組(IR組)、缺血預(yù)處理再灌注組(IPC+IR組)、假缺血預(yù)處理再灌注組(S+I

12、R組),各組根據(jù)再灌注時(shí)間點(diǎn)分別分為9個(gè)亞組,即再灌注后0h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d;
  2、動(dòng)物模型:
  (1)缺血再灌注腎損傷模型:采用夾閉雙側(cè)腎蒂30min后再灌注方法,建立缺血再灌注腎損傷模型;
 ?。?)缺血預(yù)處理模型:首先行雙側(cè)腎蒂夾閉15min鐘再灌注,4d后采取夾閉雙側(cè)腎蒂30min后再灌注建立模型;
  (3)假缺血預(yù)處理模型:首先行游離雙側(cè)腎蒂但不夾閉,4d

13、后采取夾閉雙側(cè)腎蒂30min后再灌注建立模型;
  3、實(shí)驗(yàn)方法:全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);HE染色觀察腎臟病理損害情況,腎小管間質(zhì)病理評(píng)分計(jì)量腎臟病理損害程度;實(shí)時(shí)定量RT-PCR方法檢測(cè)腎組織miR-21表達(dá)水平;RT-PCR、免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)腎組織MKK3、IL-6、TNF-α表達(dá)。
  結(jié)果
  1、腎功能的變化及腎臟病理評(píng)分:
  (1)腎功能:IR組再灌注后Scr

14、、BUN逐漸加重,于24h達(dá)最高峰,之后逐漸下降;IPC+IR組再灌注后Scr、BUN、腎臟病理損傷的變化趨勢(shì)與IR組一致,但損傷程度較IR組明顯減輕;
 ?。?)腎臟病理評(píng)分:IR組、IPC+IR組0h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d的腎小管間質(zhì)病理評(píng)分(分)分別為:1.00±0.12 v0.30±0.11、1.50±0.15v1.50±0.15、2.00±0.15 v1.30±0.16、2.60±0.2

15、3 v1.5±0.16、3.80±0.22 v1.70±0.12、3.10±0.24 v1.30±0.13、2.50±0.12 v1.30±0.11、2.30±0.24 v1.00±0.11、1.60±0.11 v0.50±0.07,在每一個(gè)時(shí)間點(diǎn)兩組間的腎小管間質(zhì)病理損害評(píng)分均有顯著差異(P<0.01)。
  2、腎臟miR-21的表達(dá)變化:IR組再灌注24h,腎臟miR-21達(dá)峰值,為基線值的286.0倍,之后維持高值;而IP

16、C+IR組再灌注0h,腎臟miR-21即達(dá)峰值,為基線值的286.0倍,并一直維持在此高峰值。
  3、MKK3的表達(dá)變化:IR組MKK3 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)在再灌注后逐漸上升,24h達(dá)到最高值,之后逐漸下降;IPC+IR組 MKK3 mRNA和蛋白質(zhì)的變化趨勢(shì)與IR組一致,但表達(dá)水平明顯低于IR組。IR組、IPC+IR組0h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d的MKK3 mRNA的水平分別為:0.89±0.

17、10 v0.51±0.06;1.45±0.13 v0.52±0.07;1.65±0.18 v0.54±0.09;2.15±0.22 v0.61±0.11;3.19±0.31 v0.81±0.09;2.66±0.28 v0.76±0.10;1.87±0.22 v0.68±0.08;1.68±0.15 v0.66±0.07;1.62±0.17 v0.63±0.08;MKK3蛋白質(zhì)的水平(OD/10000)分別為:15.51±1.56 v14

18、.36±1.51;34.24±2.82 v21.14±1.67;71.54±5.43 v31.52±2.01;145.16±8.29 v45.39±2.03;159.50±7.32 v60.34±3.67;209.74±8.13 v95.12±4.02;95.58±5.47 v62.13±2.31;87.32±5.12 v42.51±2.57;45.13±3.25 v33.18±1.99。IR組與IPC+IR組相比較,兩組在再灌注3h~

19、7d各個(gè)相同時(shí)間點(diǎn)亞組MKK3 mRNA及蛋白質(zhì)表達(dá)差異均具有顯著性(P<0.05)。
  4、IL-6和TNF-α表達(dá)變化:
 ?。?)IR組IL-6 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)在缺血再灌注后急劇上升,再灌注6h達(dá)到高峰,然后逐漸下降,而IPC+IR組IL-6 mRNA和蛋白質(zhì)一直保持較低水平表達(dá)。IR組、IPC+IR組0h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d的IL-6 mRNA水平分別為:0.65±0.11

20、 v0.30±0.07;1.53±0.14 v0.39±0.05;2.82±0.24 v0.43±0.07;2.21±0.26 v0.41±0.09;1.73±0.21 v0.44±0.09;1.55±0.18 v0.46±0.07;1.38±0.14 v0.43±0.06;1.16±0.08 v0.41±0.06;0.89±0.06 v0.40±0.05;IL-6蛋白質(zhì)的水平(OD/10000)分別為:45.22±1.58 v35.1

21、6±2.53;68.13±2.72 v42.73±1.99;135.28±8.42 v58.33±2.23;108.99±5.49 v50.11±2.41;91.18±6.32 v47.29±4.12;72.63±5.15 v46.63±3.87;66.57±4.47 v43.18±2.67;58.74±5.82 v40.12±2.85;46.33±2.27 v36.47±1.82。IR組與IPC+IR組相比較,兩組在再灌注3h~5d各

22、個(gè)相同時(shí)間點(diǎn)亞組IL-6 mRNA表達(dá)差異均具有顯著性(P<0.05);IL-6蛋白質(zhì)表達(dá)在0h~7d各個(gè)相同時(shí)間點(diǎn)亞組差異均具有顯著性(P<0.01)。
 ?。?)IR組缺血再灌注后TNF-α mRNA表達(dá)逐漸上升,于再灌注后24h達(dá)峰值,之后逐漸下降;缺血預(yù)處理后,小鼠腎臟TNF-αmRNA的變化趨勢(shì)與IR組一致,但其各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平一直較IR組低;與mRNA的表達(dá)趨勢(shì)不同的是:IR組缺血再灌注后TNF-α蛋白表達(dá)逐漸上升

23、,再灌注后48h達(dá)到高值,48h至72h保持高值,之后逐漸下降;缺血預(yù)處理后,小鼠腎臟TNF-α蛋白質(zhì)的變化趨勢(shì)與IR組一致,但在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)水平一直較IR組低。IR組、IPC+IR組0h、3h、6h、12h、24h、48h、72h、5d、7d的TNF-αmRNA水平分別為:0.80±0.20 v0.50±0.07;1.66±0.21 v0.51±0.11;2.02±0.26 v0.50±0.09;2.63±0.31 v0.54±0

24、.09;3.57±0.42 v0.54±0.12;2.82±0.47 v0.55±0.15;2.19±0.32 v0.52±0.16;1.73±0.22 v0.52±0.14;1.12±0.17 v0.50±0.09;TNF-α蛋白質(zhì)的水平(OD/10000)分別為:63.67±3.56 v62.31±4.22;82.36±5.82 v66.47±4.41;97.23±6.43 v70.39±4.57;106.67±6.29 v77.1

25、2±4.63;124.37±7.32 v81.36±4.74;167.53±7.23 v91.16±5.01;158.36±5.43 v81.82±4.45;98.42±5.22 v70.11±4.87;82.31±3.17v65.35±4.39。IR組與IPC+IR組相比較,兩組在再灌注3h~5d各個(gè)相同時(shí)間點(diǎn)亞組 TNF-α mRNA表達(dá)差異均具有顯著性(P<0.05);TNF-α蛋白質(zhì)表達(dá)在0h~7d各個(gè)相同時(shí)間點(diǎn)亞組差異均具有顯

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論