絲裂原活化蛋白激酶激酶2在胰腺癌細(xì)胞解離中作用的實驗研究.pdf

1、胰腺癌是人惡性程度最高的腫瘤之一，具有極強(qiáng)的侵襲性和轉(zhuǎn)移性.而胰腺癌細(xì)胞從原發(fā)灶的解離是其侵襲轉(zhuǎn)移過程中最重要的第一步.因此明確腫瘤細(xì)胞解離的分子機(jī)制有助于闡明胰腺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，從而為開發(fā)新的抑制胰腺癌侵襲的治療方法提供具有重要價值的靶標(biāo).
　　在早期研究中，我們建立了兩種具有不同侵襲轉(zhuǎn)移潛能的胰腺癌細(xì)胞----解離型高轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)胞（PC-1.0）和非解離型低轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)胞(PC-1)[1-3].此外，PC-1.0細(xì)胞能

2、夠向培養(yǎng)液上清中分泌細(xì)胞解離因子(dissociation factor，DF)，它能夠使非解離型低轉(zhuǎn)移胰腺癌細(xì)胞(PC-1)發(fā)生解離[4,5].
　　前期研究中，應(yīng)用Representational Difference Analysis(RDA)法檢測出了PC-1及PC-1.0細(xì)胞中包括絲裂原活化蛋白激酶激酶2(mitogen-activated protein kinasekinase2，MEK2)在內(nèi)的8個差異表達(dá)的mRN

3、A[6].
　　Mitogen-activated protein kinase(MAPK)信號傳導(dǎo)通路參與細(xì)胞的增殖、分化、解離、應(yīng)激及凋亡[7-10]，而MEK2是MAPK細(xì)胞傳導(dǎo)通路中的一個關(guān)鍵激酶.有報道指出，MEK2與癌細(xì)胞的侵襲及細(xì)胞運動相關(guān)[11-13].另有文獻(xiàn)報道，MEK抑制劑能夠抑制黑色素瘤和肝細(xì)胞癌的侵襲[14-15].但目前尚未見MEK2在胰腺癌細(xì)胞解離及侵襲中作用的相關(guān)報道.
　　在本項研究中，應(yīng)用

4、免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫組織化學(xué)、RT-PCR探討胰腺癌細(xì)胞和胰腺癌組織中MEK2 mRNA、MEK2蛋白以及p-MEK(磷酸化MEK)蛋白的表達(dá)變化，以進(jìn)一步明確MEK2在不同侵襲轉(zhuǎn)移能力的胰腺癌細(xì)胞和組織中的表達(dá)，以及MEK2在調(diào)控胰腺癌侵襲中的作用及其潛在的臨床意義.
　　目的：
　　探討MEK2在不同侵襲轉(zhuǎn)移能力的胰腺癌細(xì)胞及組織中的表達(dá)及其在細(xì)胞解離與侵襲中的作用。
　　方法：
　　應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫組織

5、化學(xué)和RT-PCR觀察胰腺癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，檢查胰腺癌細(xì)胞和組織中MEK2蛋白、p-MEK蛋白和MEK2 mRNA的表達(dá)變化.
　　結(jié)果：
　　解離型高轉(zhuǎn)移細(xì)胞PC-1.0和ASPC-1中，MEK2和p-MEK過度表達(dá);在非解離型低轉(zhuǎn)移細(xì)胞PC-1和CAPAN-2中MEK2和p-MEK表達(dá)較弱，用含有DF的PC-1.0細(xì)胞的培養(yǎng)液上清培養(yǎng)PC-1和CAPAN-2細(xì)胞后，細(xì)胞呈解離狀態(tài).用U0126(一種MEK抑制劑)培養(yǎng)PC