一種新的植物提取物抗鼻咽癌轉(zhuǎn)移的實驗研究.pdf

1、目的：臨床上,鼻咽癌具有高轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)和低分化等特點,鼻咽癌高轉(zhuǎn)移為鼻咽癌有效治療帶來了極大的困難。為尋求有效、毒性小、純度高的抗鼻咽癌藥物,本文通過高效液相色譜法分離鼻咽癌中醫(yī)藥治療常用經(jīng)驗方(益氣解毒顆粒)組分,分別將每一組分處理鼻咽癌細(xì)胞(CNE1細(xì)胞),分析其抗鼻咽癌藥效,篩選最佳藥效組分。探討該組分對鼻咽癌細(xì)胞運動轉(zhuǎn)移的影響。為開發(fā)新的抗鼻咽癌轉(zhuǎn)移藥提供實驗依據(jù)。
　　 方法：⑴選擇以植物藥黃連為主藥的益氣解毒顆粒,該

2、藥為鼻咽癌中醫(yī)藥治療常用經(jīng)驗方,在抗鼻咽癌放療后的轉(zhuǎn)移方面有較好療效。采用高效液相色譜法分離益氣解毒顆粒組分,純化、干燥,得到各組分的純凈物。⑵采用細(xì)胞增殖抑制實驗(MTT)分析上述組分的抗鼻咽癌療效,篩選抗鼻咽癌有效組分。⑶用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用、核磁共振法等方法分析有效組分的分子量、化學(xué)結(jié)構(gòu)。⑷通過MTT法分析該組分對CNE1細(xì)胞增殖的影響,通過測定藥物處理后細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH的濃度,篩選有效組分的非毒性濃度；通過異硫酸氫熒光素-鬼筆

3、環(huán)肽研究組分對CNE1細(xì)胞微絲骨架和細(xì)胞偽足形成的影響；通過劃痕和Transwell實驗研究其對CNE1細(xì)胞遷移能力的影響。⑸利用SPSS15.0統(tǒng)計軟件分析數(shù)據(jù)。
　　 結(jié)果：①MTT結(jié)果顯示,組分7為所有組分抗鼻咽癌效果最佳組分,確定該組分為下步研究的實驗材料。進一步研究表明,該組分在高濃度(20μmol/l以上)時對CNE1細(xì)胞的增殖生長有明顯的抑制作用,而在20μmol/L以下對CNE1細(xì)胞生長沒有明顯影響。0-20μm

4、ol/l為該組分對CNE1細(xì)胞的無毒性濃度。②通過核磁共振、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用等方法分析獲得該組分的分子量為418、分子式為C21H22O9,化學(xué)結(jié)構(gòu)(略)。③LDH結(jié)果顯示,YQJD7和BBR比較,處理CNE1細(xì)胞后培養(yǎng)基中LDH濃度低,細(xì)胞死亡率低,毒性作用小。④異硫酸氫熒光素-鬼筆環(huán)肽細(xì)胞微絲骨架染色結(jié)果顯示,未加藥的細(xì)胞體積較大,形態(tài)不規(guī)則,能觀察到完整的細(xì)胞微絲骨架和豐富的細(xì)胞偽足。加藥后的細(xì)胞體積小,偏圓,極性小,細(xì)胞微絲骨

5、架和偽足形成不明顯。⑤劃痕實驗結(jié)果顯示,加藥組的細(xì)胞創(chuàng)傷邊界的縮窄程度較未加藥組明顯減??；Transwell遷移實驗結(jié)果顯示,加藥組的穿膜細(xì)胞數(shù)明顯少于未加藥組,加藥后CNE1細(xì)胞的遷移能力顯著減弱。
　　 結(jié)論：⑴通過高效液相色譜法成功分離、純化獲得一新抗鼻咽癌轉(zhuǎn)移的植物藥提取物,為鼻咽癌治療提供了一新的手段。⑵提取物對鼻咽癌CNE1細(xì)胞的增殖有明顯的抑制作用,毒性較小,對CNE1細(xì)胞的形態(tài)、細(xì)胞微絲骨架和細(xì)胞偽足形成等有較明