丹皮和毛七公的抗補體活性成分研究.pdf

1、補體系統(tǒng)是人體重要的免疫防御系統(tǒng)之一，是由30余種可溶性蛋白和膜結合蛋白組成，具有抗感染、調節(jié)免疫和介導炎癥介質的作用。然而該系統(tǒng)的過度激活會造成人體自身組織的損傷，導致炎癥性疾病，如引起系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風濕性關節(jié)炎、動脈粥樣硬化、腎小球腎炎等。清熱藥的抗炎、抗病原微生物和調節(jié)免疫的作用已被實驗所證實，在治療炎癥性疾病和感染性疾病方面發(fā)揮了重要作用。因此，推測清熱藥可通過抑制補體的過度激活來發(fā)揮其抗炎和抗感染的作用。
　　本文以

2、具有抗補體活性的兩味清熱中藥丹皮(Root bark of Paeoniasuffruticosa)和毛七公(Aerial part of Glochidion eriocarpum)作為研究對象，采用活性導向分離法，明確兩味中藥的抗補體活性成分，探討其抗補體活性與藥效物質基礎的關系。
　　1、丹皮的抗補體活性成分研究
　　采用活性導向分離法，應用各種色譜分離技術，包括硅膠柱色譜、中壓ODS柱色譜、凝膠以及制備HPLC，從丹

3、皮的醇提物中分離得到67個化合物，通過理化性質和各種波譜學方法(MS、HRESIMS、UV、IR、1D NMR和2D NMR)鑒定了67個化合物，包括單萜及單萜苷衍生物28個(1-28)、苯乙酮及其苷類衍生物18個(29-46)、沒食子酰葡萄糖類化合物6個(47-52)及其它類型的化合物15個(53-67)，其中新化合物13個（圖1），分別鑒定為丹皮苷A(26)、B(2)、C(3)，丹皮素D(4)、E(5)、F(6)，丹皮酚苷A(29)

4、、B(30)、C(31)、D(32)、E(33)、F(34)和牡丹苷C(60)。
　　對其中的56個化合進行了體外抗補體活性的評價，其中39個化合物對補體的經典和旁路途徑顯示出不同程度的抑制活性，對補體的經典途徑的抑制活性CH50為0.03-2.671mM，對補體旁路途徑的抑制活性AP50別為0.13-4.00mM。其中化合物1，40和47-52對補體的經典途徑有較強抑制活性，CH500.03-0.98mM?；衔?2，19，29

5、，30對補體經典和旁路途徑均有較強的抑制活性，CH50和AP50分別為0.08-0.21mM，0.13-0.32mM。在這些活性化合物中主要涉及單萜類，苯乙酮類和沒食子酰葡萄糖類化合物，進一步構效關系研究結果表明:具有半縮醛結構的芍藥苷衍生物具有抗補體活性，化合物引入沒食子酰基大大增強該化合物的抑制活性，在化合物中的苯甲?；弦肓u基也可增強其抗補體活性;而芍藥素衍生物和4位羥基甲基化后的芍藥苷衍生物對補體的經典和旁路途徑沒有抑制活性;

6、在苯乙酮類衍生物中，含有D-芹糖結構的化合物比含有L-阿拉伯糖結構的化合物具有更強的抗補體活性，說明糖的種類也可影響化合物的抗補體活性。
　　本研究還對補體有較強的抑制活性化合物芍藥苷元酮(1)、沒食子?；炙庈?12)、沒食子?；趸炙庈?19)、丹皮苷A(26)、丹皮酚苷A(29)、丹皮酚苷C(31)、丹皮酚苷E(33)和1，2，3，4，6-五沒食子酰葡萄糖(48)進行了補體作用靶點的研究。結明顯示1作用補體前端成分C2和C

7、4;12和19作用于補體C1q、C3和C5;26作用于C1q、C3、C5和C9;而29和31作用于C1q、C3、C4和C5;33作用于C1q、C2和C3;48作用于C1q、C2和C4。結果表明各類化合物的作用靶點表現(xiàn)出多樣性和差異性，但主要作用于補體前端成分，是丹皮抗炎的物質基礎。
　　2、毛七公的抗補體活性成分研究
　　采用活性導向分離法，從毛七公乙酸乙酯部位分離鑒定了19個化合物，包括1個大柱烷類(1)，5個酚苷類(2-

8、5，13)，4個黃烷醇類(6-8，15)，3個奎尼酸衍生物(9-11)以及6個其它類型的化合物。其中新化合物5個（圖2），分別鑒定為算盤子酮醇A(1)，算盤子醇A(2)、B(3)、C(9)、D(10);11個化合物為本屬植物首次分離得到，分別為rocymosin A(4)、saccharumosides B(5)、gallocatechin-3-O-(3-O-methyl) gallate(6)、沒食子兒茶素沒食子酸酯(7)、1，3-d

9、i-O-galloyl quinicacid(11)、davidioside A(12)、異丁香酚-β-D-葡萄糖苷(13)、1-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1-methoxypropan-2-ol(14)、4-甲氧基水楊醛(16)、3-羥基-4-乙氧基-苯甲酸(17)、3-羥基-4-乙氧基-5-甲氧基苯甲酸(18);2個化合物為本植物首次分離得到，分別為catechin-3-O-(3-O-methyl) g

10、allate(8)和兒茶素(15)。
　　對分離得到的其中16個化合物進行了體外抗補體活性的評價，包括經典和旁路途徑，10個化合物具有不同程度的抑制活性。其中化合物1，4，7，9-11對補體經典途徑和旁路途徑均有較強的抑制活性，CH50和AP50分別為0.03-0.13mM，0.02-0.19mM。其余4個化合物對補體經典途徑和旁路途徑也顯示中等程度的抑制活性，CH50和AP50分別為0.28-0.55mM，0.37-0.87mM

11、?；钚曰衔镏饕婕按笾轭?、苯乙醇苷類、黃烷醇類和奎尼酸類?；衔?、3和4具有較強的抗補體活性，而5則沒有抗補體活性，說明苷元中酚羥基的存在決定化合物的抗補體活性;化合物7的抗補體活性強于6，說明甲氧基減弱了化合物的抗補體活性。
　　對各類化合物的代表性化合物算盤子酮醇A(1)，算盤子醇A(2)，沒食子兒茶素沒食子酸酯(7)和算盤子醇C(9)進行作用了補體系統(tǒng)靶點的研究。結果表明1作用于補體C1q、C2、C3和C4成分;2作用

12、于補體C1q、C2、C3、C5和C9;7作用于補體C1q、 C3和C5;9作用于補體C1q、C2、C3、C4、C5和C9。各類化合物作用補體多種成分，從而抑制過敏毒素和炎癥介質的釋放，是毛七公治療過敏性和炎癥性疾病的物質基礎。
　　本文采用活性導向分離法，明確了兩味清熱藥丹皮和毛七公的抗補體活性成分，研究結果表明兩味中藥的抗補體活性與其藥效物質基礎存在某種程度上的相關。本研究表明從抗補體活性角度來研究清熱藥的藥效物質基礎是可行的，