虎杖的抗補體活性成分研究.pdf

1、補體系統(tǒng)是體內(nèi)重要的免疫防御系統(tǒng)，參與體內(nèi)多數(shù)病理生理過程，它的正常激活對抵御外來微生物的入侵和維持機體平衡有重要作用，但其過度激活會引發(fā)系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、缺血再灌注、感染性休克、腎小球腎炎、急性呼吸窘迫綜合征等多種疾病。另據(jù)研究表明，重癥非典型肺炎(SARS)和禽流感也與補體系統(tǒng)的過度激活有關(guān)。目前對此類疾病尚無理想的治療藥物，因此臨床上急需高效、低毒、專一的新型補體抑制劑。前期研究發(fā)現(xiàn)，很多中藥，尤其是清熱類中藥普遍具

2、有抗補體活性，從中尋找天然來源的高效低毒的補體抑制劑對這些疾病的治療有重要意義。因此，本文對多種常用中草藥進(jìn)行了抗補體活性篩選并從中選取了活性較強的常用中藥虎杖作為研究對象，通過活性導(dǎo)向分離的方法分離鑒定了一系列的化合物，主要包括蒽醌類、萘醌類及二苯乙烯類等，對所得的化合物進(jìn)行了全面的抗補體活性經(jīng)典途徑和旁路途徑的測試，并進(jìn)一步對活性成分的作用靶點進(jìn)行了系統(tǒng)研究。主要研究結(jié)果如下:
　　1.虎杖的抗補體活性及活性部位的確立

3、　　通過體外細(xì)胞溶血試驗，發(fā)現(xiàn)虎杖對補體系統(tǒng)的經(jīng)典途徑的激活有較強的抑制作用，CH50值為10±4μg/ml，并對其進(jìn)行進(jìn)一步的分部位萃取和活性測試，結(jié)果表明，乙酸乙酯和正丁醇部位活性均較強，達(dá)到10μg/ml水平，因此選取乙酸乙酯和正丁醇部位作為活性研究的對象。
　　2.乙酸乙酯部位的活性導(dǎo)向分離及化合物的結(jié)構(gòu)鑒定
　　采用活性導(dǎo)向分離的方法，從虎杖的乙酸乙酯和正丁醇部位分離鑒定了21個化合物，包括蒽醌類10個:大黃素甲醚

4、(7)、大黃酚(8)、大黃素-8-甲醚(9)、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷(10)、大黃素(11)、大黃酸(12)、迷人醇(13)、6-羥基蘆薈大黃素(14)、Xanthorin(15)和Isorhodoptilometrin(16);萘醌類6個:6-乙?；?5，8-二羥基-2-甲氧基-7-甲基-1，4-萘醌(1)、6-乙?；?2-乙氧基-5-羥基-7-甲基-1，4-萘醌(2)、虎杖素C(3)、3-乙?；?5-羥基-7-甲氧基-2-

5、甲基-1，4-萘醌(4)、6-乙?；?5-羥基-2-甲氧基-7-甲基-1，4-萘醌(5)、決明松-8-O-D-葡萄糖苷(6);二苯乙烯類2個:反式白藜蘆醇(17)和云杉新苷(18);及其它類化合物3個:2，5-二甲基-7-羥基-色原酮(19)、7-羥基-4-甲氧基-5-甲基-香豆素(20)和5，7-二羥基-異苯并呋喃酮(21)。其中1、2、3為新化合物，結(jié)構(gòu)如下圖所示，15、16為首次從該植物中分離得到，15為首次從該植物中得到的茜草素

6、型蒽醌。
　　3.抗補體活性測試和活性化合物的靶點研究
　　采用體外細(xì)胞溶血試驗對虎杖中分離所得的蒽醌類、萘醌類及二苯乙烯類成分進(jìn)行了系統(tǒng)的抗補體活性經(jīng)典途徑及旁路途經(jīng)測試。篩選結(jié)果表明，7個蒽醌類成分、萘醌類成分中的虎杖素C和2個二苯乙烯類成分對補體系統(tǒng)顯示了不同程度的抑制活性，CH50和AP50值分別為5～500和50～800μg/ml。值得一提的是其中化合物迷人醇活性強于陽性對照肝素，CH50和AP50值分別達(dá)到6±2

7、μg/ml和50±5μg/ml，有望開發(fā)成為天然來源的新型補體抑制劑，為虎杖在治療補體過度激活相關(guān)疾病方面的新藥研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
　　為了更好的闡明活性成分對補體系統(tǒng)的作用機理，本實驗選取了蒽醌類成分中活性最強的化合物迷人醇和唯一的蒽醌苷大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷、萘醌類成分中的抗補體活性化合物虎杖素C及二苯乙烯類成分中的白藜蘆醇和云杉新苷進(jìn)行了抗補體的靶點研究。結(jié)果表明，迷人醇作用于補體系統(tǒng)的Cl q、C2、C4及C9組分