虎杖抗高尿酸血癥有效成分群的研究.pdf

1、高尿酸血癥是嘌呤代謝紊亂導(dǎo)致體內(nèi)尿酸過多或（和）尿酸排泄減少所引起的一組異質(zhì)性疾病，可引起痛風(fēng)，引發(fā)心血管疾病、代謝綜合征及慢性腎臟病等一系列危害人類身心健康的疾病。高尿酸血癥主要通過兩條途徑來控制，一是降低尿酸生成，二是促進(jìn)尿酸排泄，黃嘌呤氧化酶是尿酸生成關(guān)鍵酶，能催化次黃嘌呤和黃嘌呤生成尿酸，因此是降低尿酸藥物的作用靶點(diǎn)，研制高效、低毒和作用機(jī)制明確的抗高尿酸血癥藥物已成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。
　　經(jīng)課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，虎

2、杖提取物具有一定的抑制活性，對其物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制進(jìn)行研究后，首次發(fā)現(xiàn)決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷可顯著地作用于黃嘌呤氧化酶靶點(diǎn)發(fā)揮抗高尿酸血癥作用，同時(shí)發(fā)現(xiàn)大黃素-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素甲醚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷具有潛在抑制黃嘌呤氧化酶作用，虎杖苷和白藜蘆醇通過促進(jìn)尿酸排泄發(fā)揮降尿酸作用。在前期研究工作的基礎(chǔ)上，本研究在明確物質(zhì)基礎(chǔ)和作用機(jī)制的基礎(chǔ)上制備虎杖抗高尿酸血

3、癥有效成分群，為高尿酸血癥的治療提供新思路。
　　根據(jù)新藥管理辦法的要求，需要對有效成分進(jìn)行含量測定，必須有各個(gè)組分的對照品，經(jīng)市場調(diào)研發(fā)現(xiàn)目前決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷對照品是難以買到的，因此對這兩種對照品進(jìn)行了制備，以用于工藝的研究和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究。綜合運(yùn)用大孔吸附樹脂柱色譜、十八烷基硅烷鍵合硅膠柱色譜、高效液相色譜及高速逆流色譜等手段從虎杖50%大孔洗脫部位制得兩個(gè)對照品，采用

4、高效液相色譜-二極管陣列檢測器（HPLC-DAD）法對其進(jìn)行了純度測定，經(jīng)不同色譜柱和洗脫梯度檢測結(jié)果表明各對照品均為一個(gè)主色譜峰，均未出現(xiàn)異常峰；以不加校正因子的主成分自身對照法測定各對照品的純度，質(zhì)量分?jǐn)?shù)均大于98%，符合含量測定用對照品要求。
　　根據(jù)新藥審批管理辦法的規(guī)定，需要對原料、有效部位和制劑分別建立含量的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在中國藥典中對虎杖藥材的質(zhì)量控制是對虎杖苷與大黃素的水解產(chǎn)物進(jìn)行了測定，這一標(biāo)準(zhǔn)難以滿足虎杖有效成分群

5、新藥研發(fā)的質(zhì)量控制要求，因此建立了虎杖藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在建立的過程中應(yīng)用了綠色溶劑聚乙二醇作為提取溶劑并對不同產(chǎn)地不同批次虎杖藥材中降尿酸有效成分的含量進(jìn)行了測定。采用微波輔助提取法，對提取溶劑、提取溫度、提取時(shí)間、提取功率等條件對提取的影響進(jìn)行了考察研究，結(jié)果表明，聚乙二醇200濃度為60%，提取溫度為80℃，提取時(shí)間為10 min，提取功率為700 W時(shí)效果最佳，并進(jìn)行了線性關(guān)系、重復(fù)性、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性等方法學(xué)考察，均符合要求。

6、r>　　在制備工藝的研究中已確立了抗高尿酸血癥的有效組分，為了最大限度地保留有效成分，得到雜質(zhì)少且純度更高的有效成分群，對大孔樹脂分離工藝的相關(guān)參數(shù)進(jìn)樣了研究。以樹脂的最大吸附量和解吸率為考察指標(biāo)，對靜態(tài)吸附與解吸，動(dòng)態(tài)吸附與解吸過程中的重要參數(shù)進(jìn)行了研究，最終得到最佳的分離純化工藝。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)HPD-600樹脂效果較好，其最佳的工藝條件為：裝柱體積60 mL（1 BV），虎杖樣品溶液（虎杖苷、白藜蘆醇、決明酮-8-O-β-D-吡喃葡萄

7、糖苷、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷和大黃素的的質(zhì)量濃度分別為0.7477，0.0688，0.0437，0.2763和0.1343 mg·mL-1）上樣量2 BV，上樣流速1 BV·h-1，吸附平衡后先用去離子水（4 BV）和10%乙醇（4 BV）去除部分雜質(zhì)，再以1 BV·h-1的流速用90%（10 BV）的乙醇溶液進(jìn)行洗脫，最終得到虎杖降尿酸有效成分群，其含量可由21.46%提高至31.34%，回收率為86.59%。應(yīng)用 HP