mTOR-P70S6k信號(hào)在電針刺激協(xié)同BMSCs移植對(duì)腦出血大鼠突觸可塑性影響中的作用.pdf

1、目的:探討哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(Manmalian target of rapamycin，mTOR)/P70核糖體蛋白S6激酶(P70 ribosomal protein S6 kinases，P70S6k)信號(hào)在電針(Elector-acupuncture，Ea)刺激協(xié)同骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bonemarrow mesenchymal stem cells，BMSCs)移植對(duì)腦出血(Intra cerebral hemorrhage

2、，ICH)大鼠突觸可塑性影響中的作用。
　　方法:通過(guò)腦立體定向儀，向成年雄性SD大鼠尾狀核注射膠原酶與肝素，建立腦出血大鼠模型。造模后按照神經(jīng)功能評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)（Neurological Severity Score，NSS）選取NSS≥9分的SD大鼠100只隨機(jī)分為4組[Ea組、BMSCs組、Ea-BMSCs組、生理鹽水(Normal saline，NS)組]。將20μl BMSCs懸液移植至BMSCs組、Ea-BMSCs組大鼠出血

3、灶部位，等量生理鹽水移植至NS組。對(duì)Ea組及Ea-BMSCs組模型采用電針刺激大鼠的百會(huì)穴和大椎穴，每日一次。各組分別于治療處理后1d、3d、5d、7d、14d時(shí)（各組每時(shí)間點(diǎn)5只大鼠）麻醉大鼠，并灌注、固定取腦，蔗糖脫水后做冰凍切片。免疫組織化方法檢測(cè)各組不同時(shí)間點(diǎn)mTOR及其下游受體P70S6k的表達(dá)與突觸素（Synaptophysin，SYP）、突觸后致密物-95（Post synaptic density, PSD-95）的表達(dá)

4、，并研究它們之間的相關(guān)性。
　　結(jié)果:1，mTOR陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在NS組內(nèi)無(wú)明顯差異，在BMSCs組、Ea組、Ea-BMSCs組均于5d時(shí)達(dá)最高峰。同一時(shí)間點(diǎn)比較，BMSCs組、Ea組和Ea-BMSCs組中的mTOR陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比NS組多(P＜0.05);在5d、7d、14d時(shí)，Ea-BMSCs組的mTOR陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比Ea組和BMSCs組多（P＜0.05）。2，P70S6k陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在NS組內(nèi)無(wú)明顯差異，在BMSCs組和Ea組于7d時(shí)達(dá)

5、到高峰，在Ea-BMSCs組于5d時(shí)達(dá)到高峰。同一時(shí)間點(diǎn)比較，Ea-BMSCs組的P70S6k陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于NS組(P＜0.05)，Ea組在5d、7d時(shí)高于NS組(P＜0.05)，BMSCs組在7d時(shí)高于NS組(P＜0.05)。同時(shí)，Ea-BMSCs組的P70S6k陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在各時(shí)間點(diǎn)均高于BMSCs組（P＜0.05），在3d、5d、7d、14d時(shí)高于Ea組(P＜0.05)。3，BMSCs組、Ea-BMSCs組和NS組的SYP免疫陽(yáng)性產(chǎn)

6、物表達(dá)于5d時(shí)達(dá)高峰，在Ea組中于7d時(shí)達(dá)高峰。同一時(shí)間點(diǎn)比較，Ea-BMSCs組的SYP免疫陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)比Ea組和NS組高(P＜0.05)，在3d、5d、7d、14d時(shí)比BMSCs組高(P＜0.05)，Ea組在3d、5d、7d、14d時(shí)比NS組高(P＜0.05)，BMSCs組在5d、7d、14d時(shí)高于NS組（P＜0.05）。4，PSD-95免疫陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)在各組于7d時(shí)達(dá)高峰。同一時(shí)間點(diǎn)比較，Ea-BMSCs組的PSD-95免疫陽(yáng)性產(chǎn)

7、物表達(dá)高于NS組(P＜0.05)，Ea組在3d、5d、7d、14d高于NS組(P＜0.05)，BMSCs組在1d、7d、14d高于NS組(P＜0.05);Ea-BMSCs組在1d、3d、7d、14d高于Ea組(P＜0.05)，在3d、5d、7d、14d高于BMSCs組(P＜0.05)。5，mTOR、P70S6k蛋白表達(dá)與SYP、PSD-95蛋白表達(dá)具有正相關(guān)性(P＜0.01)。
　　結(jié)論:1.電針刺激協(xié)同BMSCs移植能上調(diào)腦出血

8、大鼠mTOR、P70S6k蛋白在出血灶周?chē)磉_(dá)，激活mTOR/P70S6k信號(hào)通路。2.電針刺激協(xié)同BMSCs移植比單獨(dú)電針或BMSCs移植更能增加腦出血大鼠SYP、PSD-95蛋白在出血灶周?chē)谋磉_(dá)，提高突觸可塑性，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)。3.在電針刺激聯(lián)合BMSCs移植治療腦出血大鼠中，mTOR、P70S6k蛋白表達(dá)與SYP、PSD-95蛋白表達(dá)具有顯著正相關(guān)性。mTOR/P70S6k信號(hào)通路在電針刺激協(xié)同BMSCs移植對(duì)腦出血大鼠突觸可