5-HT6R介導(dǎo)的Fyn信號(hào)通路在癲癇突觸可塑性變化中的作用研究.pdf

1、目的：
　　本研究以氯化鋰-匹羅卡品（Lithium chloride-Pilocarpine, LiCl-PILO）點(diǎn)燃的癲癇大鼠為動(dòng)物模型，在癲癇發(fā)作后的不同時(shí)間點(diǎn)，觀察5-HT6R與突觸可塑性指標(biāo)之間的動(dòng)態(tài)變化關(guān)系；通過(guò)5-HT6R拮抗劑SB-271046的干預(yù)，觀察5-HT6R介導(dǎo)的Fyn信號(hào)通路的表達(dá)變化，并從突觸可塑性角度探討5-HT6R拮抗劑對(duì)改善癲癇及其合并的認(rèn)知功能障礙疾病的可能細(xì)胞分子機(jī)制。
　　方法：<

2、br>　　1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組：分組一：成年雄性SD大鼠（N1=54））隨機(jī)分為正常組和癲癇模型組，模型組再按照造模后不同時(shí)間點(diǎn)（1d、7d、15d、30d、60d）分為5個(gè)亞組，每組9只。分組二：N2=40，隨機(jī)分為正常組（Vehicle）、癲癇模型組（EP）、安慰劑組（EP+Hp-β-CD）及SB-271046干預(yù)組（EP+SB271046），每組10只。
　　2、用氯化鋰-匹羅卡品化學(xué)點(diǎn)燃方法制備顳葉癲癇大鼠模型。
　　3

3、、分組一:Timms染色法觀察癲癇大鼠海馬苔蘚出芽動(dòng)態(tài)情況；Real-time PCR檢測(cè)海馬中5-HT6R、突觸素（Synaptophysin）、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）mRNA水平的動(dòng)態(tài)變化。
　　4、分組二：Western blot法檢測(cè)Fyn/ERK1/2信號(hào)通路中Fyn、ERK1/2、p-ERK1/2的蛋白表達(dá)變化；電鏡觀察海馬突觸超微結(jié)構(gòu)變化；Timm

4、染色觀察馬苔蘚纖維出芽情況；免疫熒光染色法觀察海馬中星形膠質(zhì)細(xì)胞活化情況；Real time PCR檢測(cè)海馬突觸可塑性相關(guān)指標(biāo)GluR、NMDAR1及GFAP的mRNA水平變化。
　　結(jié)果：
　　1、癲癇大鼠可于SE后7d出現(xiàn)海馬苔蘚纖維出芽及突觸素（Synaptophysin）的表達(dá)上調(diào)，且程度呈現(xiàn)隨時(shí)間遞增的趨勢(shì)，至30d左右趨于平穩(wěn)（p(60d vs30d)>0.5，即30d與60d差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）。
　　2、

5、膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）的表達(dá)在30d、60d組有明顯上調(diào)（與正常對(duì)照組比較，分別升高了79％倍（p<0.001）、87%（p<0.001））；5-HT6R的表達(dá)呈兩階段變化：7d、15d與正常組比較分別下降了45.8%（p<0.001）、37.5%（p<0.001）；30d、60d與正常組比較，分別增加了2.08倍（p<0.001）、2.17倍（p<0.001）。
　　3、5-HT6R拮抗劑SB271046可提高癲癇大鼠海馬

6、Fyn、pERK1/2/ERK1/2的表達(dá)（SB-271046干預(yù)后，F(xiàn)yn、pERK1/2/ERK1/2表達(dá)量較模型組分別升高了76%（p<0.01）、130%（p<0.05））。
　　4、5-HT6R拮抗劑SB271046可改善癲癇大鼠海馬突觸超微結(jié)構(gòu)異常、降低星形膠質(zhì)細(xì)胞增生及海馬苔蘚纖維出芽程度；增加突觸可塑性相關(guān)指標(biāo)GluR、NMDAR1的表達(dá)（癲癇模型組與正常組對(duì)比，GluR和NMDAR1的mRNA水平分別下降了72%

7、（p<0.001）、63%（p<0.001）；SB271046干預(yù)后，癲癇大鼠的GluR和NMDAR1的mRNA水平分別升高了3.89倍（p<0.001）、2.81倍（p<0.001））。
　　結(jié)論：
　　氯化鋰-匹羅卡品點(diǎn)燃的大鼠癲癇模型可模擬人類顳葉癲癇，出現(xiàn)包括海馬苔蘚纖維出芽、星形膠質(zhì)細(xì)胞增生、突觸功能改變（synap top hys in表達(dá)增加）在內(nèi)的海馬突觸可塑性改變，5-HT6R可能在癲癇突觸可塑性改變中發(fā)揮