BMSCs移植聯(lián)合電針刺激對(duì)腦出血大鼠GAP-43和Syp表達(dá)的影響.pdf

1、目的:研究電針刺激聯(lián)合BMSCs移植對(duì)腦出血(ICH)大鼠尾殼核及其附近出血區(qū)GAP-43和Syp表達(dá)的的影響。
　　方法:將GFP標(biāo)記的BMSCs常規(guī)復(fù)蘇、傳代,經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)6小時(shí)后收集細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞濃度至2.5×107個(gè)/ml備用。采用膠原酶加肝素誘導(dǎo)法在SD大鼠腦尾殼核附近注射膠原酶和肝素以構(gòu)建ICH模型。分別于模型構(gòu)建后2小時(shí)、24小時(shí)和48小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)損害程度評(píng)分(NSS評(píng)分),選大于9分者行下一步實(shí)驗(yàn)。在模型構(gòu)建后3天分

2、別注入生理鹽水20μl、BMSCs20μl和BMSCs20μl2小時(shí)后輔以電針刺激大鼠百會(huì)穴和大椎穴,建立實(shí)驗(yàn)對(duì)照組(NS組)、BMSCs移植組(BMSCs組)和BMSCs移植聯(lián)合電針組(Ea-BMSCs組),各組又以治療時(shí)間的不同分為移植后1天、3天、5天、7天和14天5個(gè)亞組,于上述時(shí)間點(diǎn)對(duì)大鼠NSS評(píng)分后處死大鼠取材備用。分別采用Western blot和RT-PCR法檢測(cè)尾殼核區(qū)GAP-43和Syp蛋白及mRNA在不同組別各個(gè)時(shí)

3、間點(diǎn)的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:(1)NSS評(píng)分。移植前評(píng)分:在大鼠ICH建模后移植前,同一時(shí)間點(diǎn)不同組別即Ea-BMSCs組、BMSCs組和NS組三組間 NSS評(píng)分基本一致,無(wú)顯著性差異(P>0.05)。移植后評(píng)分:Ea-BMSCs組在3天、5天、7天、14天與NS組比較NSS評(píng)分顯著下降(P<0.05);BMSCs組5天與NS組比較NSS評(píng)分明顯下降(P<0.05);Ea-BMSCs組在5、7和14天與BMSCs組比較NSS評(píng)分下

4、降(P<0.05)。(2)Western blot定量檢測(cè)GAP-43和Syp蛋白表達(dá)。三組在移植后1天GAP-43少量表達(dá),而Syp在1天未見(jiàn)明顯表達(dá),3天后才可見(jiàn)少量表達(dá)。三組各時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)比較:Ea-BMSCs組GAP-43在3天、5天、7天、14天表達(dá)逐漸增強(qiáng),Syp于5天、7天、14天表達(dá)增強(qiáng),兩種標(biāo)記表達(dá)在7-14天最強(qiáng)(P<0.05);BMSCs組GAP-43在3天、5天和7天表達(dá)逐漸增強(qiáng),7天出現(xiàn)高峰(P<0.05),以后

5、減弱,Syp于5天、7天、14天表達(dá)增強(qiáng),在7-14天較強(qiáng);NS組GAP-43在3天、5天和7天表達(dá)逐漸增強(qiáng),7天較強(qiáng),隨后減弱,而Syp于5天和7天可見(jiàn)表達(dá),14天未見(jiàn)明顯表達(dá)。三組組間比較:于5天、7天和14天Ea-BMSCs組與 NS組比較 GAP-43和Syp表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.05), Ea-BMSCs組在7天和14天與 BMSCs組比較 GAP-43表達(dá)顯著增強(qiáng)(P<0.05),而Syp表達(dá)在14天較BMSCs組增強(qiáng)(P<

6、0.05)。(3)RT-PCR半定量檢測(cè)GAP-43和Syp mRNA水平。三組在移植后1天GAP-43 mRNA水平即可升高,而Syp mRNA水平較低,3天后Syp mRNA水平升高。三組各時(shí)間點(diǎn)組內(nèi)比較:Ea-BMSCs組GAP-43于3天、5天、7天、14天mRNA水平逐漸升高,Syp于5天、7天、14天mRNA水平較高,兩種mRNA水平在7-14天最高(P<0.05);BMSCs組GAP-43 mRNA水平在3天、5天和7天升

7、高,尤以7天為甚(P<0.05),隨后開(kāi)始下降,Syp mRNA于5天、7天、14天表達(dá)較高,于7-14天更高;NS組GAP-43 mRNA水平在3天、5天和7天表達(dá)逐漸升高,7天較高,然后下降, Syp于5天和7天可見(jiàn)mRNA表達(dá),14天無(wú)顯著表達(dá)。三組組間比較:在5天、7天和14天Ea-BMSCs組與NS組比較GAP-43和Syp mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.05),Ea-BMSCs組在5天、7天和14天與BMSCs組比較GA

8、P-43 mRNA表達(dá)明顯升高(P<0.05),Syp mRNA在14天較 BMSCs組升高(P<0.05)。
　　結(jié)論:(1) BMSCs移植聯(lián)合電針刺激治療實(shí)驗(yàn)性ICH大鼠較單純BMSCs移植更能提高出血灶及其周邊區(qū)GAP-43的表達(dá),促進(jìn)軸突生長(zhǎng);(2)BMSCs移植聯(lián)合電針刺激治療實(shí)驗(yàn)性 ICH大鼠較單純 BMSCs移植能明顯增強(qiáng) Syp的表達(dá),加速突觸再生;(3)電針刺激聯(lián)合 BMSCs移植治療大鼠ICH的作用機(jī)制可能是